Team:Chiba/protocol/phenotype/T9002/j

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目的
T9002を導入した大腸菌は、AHL存在下でGFPを発現する. 種種の濃度のAHLを添加し、添加後の蛍光強度変化の時間依存性を調べる.

装置 & 試薬

 * 装置
 * しんとう培養器
 * Innova 4200 Benchtop or Floor-Stackable Incubator Shaker(37℃)
 * タイテック BioShaker BR-33FM(30℃,200rpm)
 * 48 well plate(deep well)
 * Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
 * Beckman Allegratm X-12R Centrifuga(Beckman Coulter)


 * 試薬
 * AHL(100uM,5uM,100nM)
 * E.coli JW1908 Culture Containing T9002

プロトコル
プレ培（O/N,測定日の前日）
 * T9002をグリセロールストックからpickして、LB-Amp液体培地で培養する.
 * 37℃しんとう培養器で一晩培養する

翌日
 * 培養液100μLを、40mlのLB-Amp液体培地に加え、37℃で6-8時間しんとう培養する.
 * Wash-->培養液を50mlファルコンチューブに、10mlずつ分注.
 * -->3500rpmで6分間遠心. 上澄みを捨てる.
 * -->新しいLB-Amp培地を10mlずつ加え（1倍希釈）、pipettingにより再懸濁.


 * 48　deep well plateに、1mlずつ分注.
 * AHLを以下の表に示すのように添加する.
 * 96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する.
 * 37℃でしんとう培養


 * 2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する.
 * 測定条件
 * 測定前-->shake:On time = 1min,Off time = 10 sec,
 * 測定-->integration time = 1000ms
 * Beam width:Normal Beam
 * Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission)

issues? discussion

 * 蛍光強度がいくつ以上なら目視で確認できるのか