Team:Chiba/protocol/gelcheck/j

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アガロースゲル作成

 * 1) 電気泳動用アガロースを0.7%（12~0.8bp）となるようにTAE Bufferに加える.
 * 2) 大型ゲル、小型ゲルを１個ずつ作るときは、電気泳動用アガロースを0.7g、TAE Bufferを100mLぐらいがちょうど良い.
 * 3) 電子レンジで３分間、ときどき振り混ぜながら加熱してアガロースを溶かす. ゲルの溶け残りがないようにする.
 * 4) ゲル型にのせ台を入れてゲル柵を設置したところに、溶かしたアガロースを流し込む. この時ゲル柵などに気泡が生じないようにする. また、ゲル柵がのせ台の底に接しないように十分注意する.
 * 5) 固まるまで30分以上室温で放置する.

電気泳動

 * 1) ゲルが固まったらゲル柵を垂直に抜き取る.
 * 2) のせ台ごとに電気泳動槽にセットする. この時電気泳動槽に複数ののせ台を入れても問題はないが、電気泳動速度が若干遅くなる気がする.
 * 3) 電気泳動槽中にTAE Bufferを、ゲル面上1mmくらいになるまで加える. ゲルのWellの中に空気がないか確認する.
 * 4) DNAサンプル（DNAサンプル＋（6×）Loading Dye ＋必要ならばNFWなど）を調整する.
 * 5) 調整したDNAサンプルと、5μLの1kbp ladderをWellに静かに打ち込む.
 * 6) 電極を接続して電気泳動槽の蓋を閉め、100Vで約3分間通電する. Loading Dyeに含まれる黄色色素（オレンジG:約50bp）が8割以上進むぐらいが目安.

DNAのバンドを見る

 * 1) ゴム手袋を着用する.
 * 2) 電気泳動槽からゲルをのせ台ごと取り出し、ethidium bromide溶液にゲルのみを浸す. ethidium bromideは発がん性があると言われているので十分注意して扱うこと.
 * 3) 30～40分ほど放置して着色させる. あまり長すぎるとDNAを破壊する恐れがあるので注意が必要.
 * 4) ethidium bromideからゲルを取り出しUVライトを照射. 写真を撮ってバンドを観察する.

ゲル電の後は

 * バンドを見たいだけなら終わり.
 * ライゲーションに使うならゲル抽出の項目へ続く.