Team:Chiba/protocol/DNA Purification/qia/j

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QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル

 * 1) スピンダウンしたペレットに、Buffer:P1（冷蔵庫に保管）を200μL入れてボルテックスで懸濁
 * 2) Buffer:P2（アルカリ性）を250μL加え、４～６回チューブを転倒させる. 溶液は青色に変化する. この時DNAが壊れてしまう可能性があるので優しく取り扱うこと.
 * 3) Buffer:N3（酸性）を350μL加え、すぐにチューブを４～６回転倒させて完全に混ぜる. （中和反応）沈殿が固まってしまうのを防ぐため、N3を加えたら溶液をすばやく優しくまぜる.
 * 4) 10分間、遠心機で13,000rpm設定で遠心. 白い塊状のペレット（菌の死骸）が形成する.
 * 5) 4の上澄み液を直接、またはピペッティングによりQIAprepスピンカラムに入れる.
 * 6) 1分間遠心（13,000rpm）してカラムにDNAをつける.
 * 7) カラムのチューブにたまった溶液を捨てて、チューブの水気を取ってからカラムをつける.
 * 8) Buffer:PBを400μL入れてさらに1分間遠心（13,000rpm）. さらにDNA・プラスミドをカラムにくっつける.
 * 9) カラムのチューブにたまった溶液を捨てて、チューブの水気を取ってからカラムをつける.
 * 10) Buffer:PEを400μL入れて1分間遠心（13,000rpm）. QIAprepカラムをこの操作で洗浄する.
 * 11) 9～10の操作を繰り返す.
 * 12) 残っているBuffer:PEを除去するためにさらに1分間空遠心（13,000rpm）. PEのEtha-OHが残っていると後に続く酵素反応が阻害されてしまう.
 * 13) QIAprepのカラムを新しい1.5μLのマイクロ遠心チューブにセットする. この時、Etha-OHをとばすために少しだけ時間をおくとよい.
 * 14) Buffer:EBを100μLを各カラムの中央に敵かし１分間静置. ここでカラムからDNAの溶出を行う.
 * 15) 1分間遠心（13,000rpm）し、カラムをはずしてチューブの蓋を閉めたらミニプレ完了！