Team:Chiba/Calendar-Home/21 August 2008

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を2ml培養、12h。ただしコロニーが1個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、
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<br>37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを10<sup>5</sup>希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
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<br>37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
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<br>両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
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コロニー数
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:95℃,5min -> ( 95℃,1min -> 52℃,1min -> 72℃,1min )・・・25cycles -> 72℃,10min -> 6℃
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:--->'''[[Team:Chiba/protocol/gelcheck|Gel Check]]'''
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|[[Image:Chiba-0821.JPG]]
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::*BBa_C0070(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070] -> OK
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::*BBa_C0070(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070] -> OK
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:'''[[Team:Chiba/protocol/transformation|Transformation]]'''
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:competent cells : XL10G
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::*BBa_S03154(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154]
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::*BBa_S03154(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154]
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::*BBa_I9026(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026]
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::*BBa_I9026(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026]
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::*BBa_I9030(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030]
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::*BBa_I9030(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030]
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--->(23/8)'''[[Team:Chiba/protocol/digestion|Digestion]]'''
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===Team:Output===
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[[Team:Chiba/protocol/transformation|Transformation]]
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*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J32007 BBa_J32007](Lux CDABE)-->no colony
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*[http://partsregistry.org/Part:BBa_B0034 BBa_B0034](RBS)-->colony
:結果:成功→RBS  
:結果:成功→RBS  
:失敗→Lux CDABE(二回行ったがどちらもコロニーができなかった)→三回目に成功
:失敗→Lux CDABE(二回行ったがどちらもコロニーができなかった)→三回目に成功

Revision as of 06:57, 24 October 2008

>Home | Notebook

20 August 2008 <|> 22 August 2008

Contents

Laboratory work

Team:Input

8.20にtransformationしたもの

  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)
  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)
  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2007)
  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2006)
  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_J22136 BBa_J22136](2007)
  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_J22141 BBa_J22141](2007)

を2ml培養、12h。ただしコロニーが1個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、 さらに1h培養した。



UV照射実験(プレート編)(~24日)
-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)の2plasmidを使用。
グリストをつついて、試験管で2ml培養。(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。
37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを105希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
UVを照射して9h後、21h後にそれぞれ両方のプレートに次の同じ操作をする。
両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
37℃,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに105希釈して20μl撒いた。


コロニー数

AHLなしAHL100nM
9h 606453
12h 146151


AHLが入っていないほうのコロニーはいづれも光っていた。→機能チェックはOK



Team:Communication

(20/8)--->PCR
  • BBa_C0070(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070]
  • BBa_C0070(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070]
  • BBa_C0076(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076]
  • BBa_C0078(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078]
  • BBa_C0078(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078]


DNA Template 1
dNTP mix 10
Foward Primer 5
Reverse Primer 5
DNA polymerase TAQ 1
Thermopol Buffer 5
dH2O 28
TOTAL 50μL


95℃,5min -> ( 95℃,1min -> 52℃,1min -> 72℃,1min )・・・25cycles -> 72℃,10min -> 6℃


--->Gel Check
Chiba-0821.JPG
Sample DNA 3
Loading Dye 2
dH2O 7
TOTAL 12μL
From left;
  • BBa_C0078(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078] -> None
  • BBa_C0078(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078] -> None
  • BBa_C0076(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076] -> None
  • BBa_C0070(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070] -> OK
  • BBa_C0070(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070] -> OK


Transformation
competent cells : XL10G
  • BBa_S03154(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154]
  • BBa_S03154(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154]
  • BBa_I9026(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026]
  • BBa_I9026(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026]
  • BBa_I9030(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030]
  • BBa_I9030(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030]



--->(23/8)Digestion


Team:Output

Transformation

  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_J32007 BBa_J32007](Lux CDABE)-->no colony
  • [http://partsregistry.org/Part:BBa_B0034 BBa_B0034](RBS)-->colony
結果:成功→RBS
失敗→Lux CDABE(二回行ったがどちらもコロニーができなかった)→三回目に成功