Team:Chiba/Calendar-Home/22 August 2008

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(Difference between revisions)

Revision as of 06:59, 24 October 2008

>Home | Notebook

18 August 2008 <|> 20 August 2008

Laboratory work

Team:Input

Mini prep

2ml培養した

[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22136 BBa_J22136](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22141 BBa_J22141](2007)

をミニプレした。

insert check:Digestion

[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22136 BBa_J22136](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22141 BBa_J22141](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)

[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)と[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。

混ぜ表

	double	simgle
dH₂O	14	25
10×BSA	7	10
10×NE	7	10
EcoRI	3.5	5
PstI	3.5	-

UV照射実験(液体編)(~24)
-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)の2plasmidを使用。
グリストをつついて2ml培養×2(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)
37℃で、12h培養後、濁ったらそのまま小さなプレートにLB培地ごと移してUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプまでの距離は8cm。
UVを照射して、15min,4h,8h,12h,たったら、両方のプレートからLB培地ごと20μlずつ採取しそれぞれ10⁵希釈し、そこから20μlをそれぞれ(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)のプレートに撒いた。

37℃で12h培養した後のコロニー数

	AHLなし	AHL100nM
15min	136	0?
4h	40	31
8h	10	0
12h	0	0

いづれのプレートもAHLが入っていないものはGFPが確認できたが、AHL100nMのものは確認できなかった。

Team:Communication

Transformation

competent cells : XL10G

BBa_J13002(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J13002]
BBa_J13002(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J13002]
BBa_J04500(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500]
BBa_J04500(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500]

(Locate & 2 Punch ~iyama ver.~)

BBa_C0076(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076] -> No colonies on plates
BBa_C0077(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0077] -> No colonies on plates
BBa_C0078(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078] -> No colonies on plates
BBa_J04500(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500] -> No colonies on plates

--->(24/8)Mini prep

Team:Output

Mini prep

[http://partsregistry.org/Part:BBa_J52008 BBa_J52008](Luciferase)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620 BBa_F2620]
[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J33202 BBa_J33202](LacZ)
PUC19
PGEX VENUS YFP(GST fusion)

Transformation

PGEX VENUS YFP(GST fusion)

@@ Line 1: / Line 1: @@
-'''OUTPUT TEAM'''
+>[[Team:Chiba|Home]] | [[Team:Chiba/Notebook|Notebook]]
-*Mini Prep
-J52008(2007),F2620,T9002,PUC19(LacZ),VenusYFP,J33202(2007)
-結果:ゲル電→J33202はバンドの位置が違っていましたが、大丈夫だと思われます。他は正しいバンドがでました。
+[[Team:Chiba/Calendar-Home/18 August 2008|18 August 2008 <]]|[[Team:Chiba/Calendar-Home/20 August 2008|> 20 August 2008]]
+==Laboratory work==
+===Team:Input===
+'''[[Team:Chiba/protocol/DNA Purification/sigma|Mini prep]]'''
+<BR>2ml培養した
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2007)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2006)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22136 BBa_J22136](2007)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22141 BBa_J22141](2007)
+をミニプレした。
+insert check:'''[[Team:Chiba/protocol/digestion|Digestion]]'''
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2006)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2007)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22136 BBa_J22136](2007)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22141 BBa_J22141](2007)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)
+[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)と[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。
+<BR>
+<BR>混ぜ表
+<table width="200" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
+<td width="257"></td>
+<td>double</td><td>simgle</td>
+<tr>
+<td>dH<sub>2</sub>O</td>
+<td>14</td><td>25</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>10×BSA</td>
+<td>7</td><td>10</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>10×NE</td>
+<td>7</td><td>10</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>EcoRI</td>
+<td>3.5</td><td>5</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>PstI</td>
+<td>3.5</td><td>-</td>
+</tr>
+</table>
+<BR>UV照射実験(液体編)(~24)
+<BR>-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)の2plasmidを使用。
+<BR>グリストをつついて2ml培養×2(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)
+<BR>37℃で、12h培養後、濁ったらそのまま小さなプレートにLB培地ごと移してUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプまでの距離は8cm。
+<BR>UVを照射して、15min,4h,8h,12h,たったら、両方のプレートからLB培地ごと20μlずつ採取しそれぞれ10<sup>5</sup>希釈し、そこから20μlをそれぞれ(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)のプレートに撒いた。
+<BR>37℃で12h培養した後のコロニー数
+<table width="200" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
+<td width="257"></td>
+<td>AHLなし</td><td>AHL100nM</td>
+<tr>
+<td>15min</td>
+<td>136</td><td>0?</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>4h</td>
+<td>40</td><td>31</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>8h</td>
+<td>10</td><td>0</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>12h</td>
+<td>0</td><td>0</td>
+</tr>
+</table>
+<BR>
+いづれのプレートもAHLが入っていないものはGFPが確認できたが、AHL100nMのものは確認できなかった。
+===Team:Communication===
+:'''[[Team:Chiba/protocol/transformation|Transformation]]'''
+:competent cells : XL10G
+::*BBa_J13002(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J13002]
+::*BBa_J13002(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J13002]
+::*BBa_J04500(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500]
+::*BBa_J04500(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500]
+:(Locate & 2 Punch ~iyama ver.~)
+::*BBa_C0076(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076] -> No colonies on plates
+::*BBa_C0077(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0077] -> No colonies on plates
+::*BBa_C0078(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078] -> No colonies on plates
+::*BBa_J04500(2008) [http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500] -> No colonies on plates
+--->(24/8)'''[[Team:Chiba/protocol/DNA Purification/sigma|Mini prep]]'''
+===Team:Output===
+[[Team:Chiba/protocol/DNA_Purification/sigma|Mini prep]]
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J52008 BBa_J52008](Luciferase)
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620 BBa_F2620]
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J33202 BBa_J33202](LacZ)
+*PUC19
+*PGEX VENUS YFP(GST fusion)
+[[Team:Chiba/protocol/transformation|Transformation]]
+*PGEX VENUS YFP(GST fusion)