Team:Chiba/Calendar-Home/22 August 2008

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21 August 2008 <|> 23 August 2008

Laboratory work

Team:Input

Mini prep: Minipreped the cultures(<--21/8).

BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J06650(2006)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)

insert check:Digestion

BBa_J06650(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_R0051(2007)

Sample No.	1-4	1-6
dH₂O(μl)	14	25
10×BSA(μl)	7	10
10×NE(μl)	7	10
EcoRI(μl)	3.5	5
PstI(μl)	3.5	-
Total(μl)	35	50

UV irradiation test

two plasmids from ?

         o -Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-
         o -PcI-GFP-p15a-Cm-(JW1908)

1. Incubated cultures(from Glycerol Stocks) with 2mL of LB-Ampicillin Medium for 12 hours at 37 degrees.
2. moved the cultures to small plates and started UV-irradiation. (wavelength:254nm,distance from the UV lamp to the cultures were 8cm.)(Put the Negative control plate ina dark place. )
4. covered the plates with polyethylene wrap.
5. after irradiation(Sample:15min,4h,8h,12h)(Negative Control:0h,1h,4h,8h)

UV irradiation test(Liquid phase)(~24)
-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW,2plasmid)
グリストをつついて2ml培養×2(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)
37°Cで、12h培養後、濁ったらそのまま小さなプレートにLB培地ごと移してUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプまでの距離は8cm。
UVを照射して、15min,4h,8h,12h,たったら、両方のプレートからLB培地ごと20μlずつ採取しそれぞれ10⁵希釈し、そこから20μlをそれぞれ(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)のプレートに撒いた。

The number of colonies aftetr culturing at 37C for 12h.

	no AHL	AHL100nM
15min	136	0
4h	40	31
8h	10	0
12h	0	0

いづれのプレートもAHLが入っていないものはGFPが確認できたが、AHL100nMのものは確認できなかった。

Team:Communication

Transformation

competent cells : XL10G

BBa_J13002(2007)
BBa_J13002(2006)
BBa_J04500(2007)
BBa_J04500(2006)

(Locate & 2 Punch ~iyama ver.~)

BBa_C0076(2008) -> No colonies on plates
BBa_C0077(2008)　-> No colonies on plates
BBa_C0078(2008) -> No colonies on plates
BBa_J04500(2008) -> No colonies on plates

--->(24/8)Mini prep

Team:Output

Mini prep

BBa_J52008
BBa_F2620
BBa_T9002
BBa_J33202
PUC19
PGEX VENUS YFP(GST fusion)

Transformation

PGEX VENUS YFP(GST fusion)

@@ Line 71: / Line 71: @@
 . after irradiation(Sample:15min,4h,8h,12h)(Negative Control:0h,1h,4h,8h)
-<BR>UV照射実験(液体編)(~24)
+<BR>UV irradiation test(Liquid phase)(~24)
-<BR>-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)の2plasmidを使用。
+<BR>-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW,2plasmid)
 <BR>グリストをつついて2ml培養×2(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)
 <BR>37°Cで、12h培養後、濁ったらそのまま小さなプレートにLB培地ごと移してUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプまでの距離は8cm。
 <BR>UVを照射して、15min,4h,8h,12h,たったら、両方のプレートからLB培地ごと20μlずつ採取しそれぞれ10<sup>5</sup>希釈し、そこから20μlをそれぞれ(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,cm,AHL100nM)のプレートに撒いた。
-<BR>37°Cで12h培養した後のコロニー数
+<BR>The number of colonies aftetr culturing at 37C for 12h.
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