Team:Chiba/jk/α

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(Difference between revisions)
(2008.8.28)
(2008.8.28)
Line 208: Line 208:
<BR>RBS+CI
<BR>RBS+CI
<BR>混ぜ表
<BR>混ぜ表
 +
<table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
 +
<tr>
 +
<td width="257">Sample No</td>
 +
<td>①</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>DNA</td>
 +
<td>1</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>FW primer</td>
 +
<td>2.5</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>VR primer</td>
 +
<td>2.5</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>dNTPmix</td>
 +
<td>5</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>thermo pol buffer</td>
 +
<td>5</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>DNA pol(VENT)</td>
 +
<td>1</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>dH2O</td>
 +
<td>34</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>TOTAL</td>
 +
<td>50</td>
 +
</tr>
 +
</table>
 +

Revision as of 05:39, 7 September 2008

入力班のぺーじ。


Contents

2008.8.20

PCR:PCR
・BBa_J22136(2007)①
・BBa_J22136(2008)②
・BBa_J22141(2007)③
・BBa_J22141(2008)④
・BBa_E0612(2008)⑤

>
Sample No
DNA tamplate 11111
FW primer 55555
VR primer 55555
dNTPmix 1010101010
thermo pol buffer 1010101010
DNA pol(VENT) 11111
dH2O 6868686868
TOTAL 100100100100100


→gel check:Gel Check

>
Sample No
Sample DNA 11111
loading dye 11111
dH2O 44444
Total 66666

→どれもバンド出ず。




trnsformation:Transformation


・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)

→BBa_J22141のみコロニーがほとんど生えていなかった。(1個のみ)

2008.8.21

8.20にtransformationしたもの
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007) を2ml培養、12h。ただしコロニーが1個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、 さらに1h培養した。

2008.8.22

mini prep:Mini Prep
2ml培養した
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
をミニプレした。


insert check:Digestion


BBa_J06650(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2007)とBBa_R0051(2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。

混ぜ表

doublesimgle
dH2O 1425
10×BSA 710
10×NE 710
EcoRI 3.55
PstI 3.5-

2008.8.25

BBa_J22136(insert check済み)のグリセロールストックづくり

プレートに生えたコロニーをpickして、試験管で2ml培養(LB-Amp,37℃,12h)
培養した試験管から180μl,LB-Ampを880μlとって、OD=0.495にした。


OD=0.495培養液 0.67μl
60%グリセロール 0.33μl
20%グリセロールストック(計) 1.00ml

2008.8.28

transformation:Transformation
BBa_I7106(2007) 生えてきたコロニーを10ml培養してmini prep(60mlで溶出):mini Prep
→Digestion:Digestion
混ぜ表

double
dH2O 2
10×BSA 1
10×NE 1
EcoRI 0.5
PstI 0.5
DNA 5
total 10

Digestion 37℃、30分
プラスミドは33.6ng/μl



PCR:PCR
RBS+CI
混ぜ表

Sample No
DNA 1
FW primer 2.5
VR primer 2.5
dNTPmix 5
thermo pol buffer 5
DNA pol(VENT) 1
dH2O 34
TOTAL 50





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