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Team:Chiba/jk/α
From 2008.igem.org
(→2008.8.28) |
(→2008.8.28) |
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| Line 208: | Line 208: | ||
<BR>RBS＋CI | <BR>RBS＋CI | ||
<BR>混ぜ表 | <BR>混ぜ表 | ||
| + | <table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000"> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td width="257">Sample No</td> | ||
| + | <td>①</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>DNA</td> | ||
| + | <td>1</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>FW primer</td> | ||
| + | <td>2.5</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>VR primer</td> | ||
| + | <td>2.5</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>dNTPmix</td> | ||
| + | <td>5</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>thermo pol buffer</td> | ||
| + | <td>5</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>DNA pol(VENT)</td> | ||
| + | <td>1</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>dH2O</td> | ||
| + | <td>34</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>TOTAL</td> | ||
| + | <td>50</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | </table> | ||
| + | |||
Revision as of 05:39, 7 September 2008
入力班のぺーじ。
Contents |
2008.8.20
PCR:PCR
・BBa_J22136(2007)①
・BBa_J22136(2008)②
・BBa_J22141(2007)③
・BBa_J22141(2008)④
・BBa_E0612(2008)⑤
| Sample No | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ |
| DNA tamplate | 1 | 1 | 1 | 1 | >1 |
| FW primer | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| VR primer | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| dNTPmix | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| thermo pol buffer | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| DNA pol(VENT) | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| dH2O | 68 | 68 | 68 | 68 | 68 |
| TOTAL | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
→gel check:Gel Check
| Sample No | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ |
| Sample DNA | 1 | 1 | 1 | 1 | >1 |
| loading dye | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| dH2O | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| Total | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 |
→どれもバンド出ず。
trnsformation:Transformation
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
→BBa_J22141のみコロニーがほとんど生えていなかった。(１個のみ)
2008.8.21
8.20にtransformationしたもの
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
を２ml培養、12h。ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、
さらに1h培養した。
2008.8.22
mini prep:Mini Prep
2ml培養した
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
をミニプレした。
insert check:Digestion
BBa_J06650(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2007)とBBa_R0051(2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。
混ぜ表
| double | simgle | |
| dH2O | 14 | 25 |
| 10×BSA | 7 | 10 |
| 10×NE | 7 | 10 |
| EcoRI | 3.5 | 5 |
| PstI | 3.5 | - |
2008.8.25
BBa_J22136(insert check済み)のグリセロールストックづくり
プレートに生えたコロニーをpickして、試験管で2ml培養(LB-Amp,37℃,12h)
培養した試験管から180μl,LB-Ampを880μlとって、OD=0.495にした。
| OD=0.495培養液 | 0.67μl |
| 60%グリセロール | 0.33μl |
| 20%グリセロールストック(計) | 1.00ml |
2008.8.28
transformation:Transformation
BBa_I7106(2007)
生えてきたコロニーを10ml培養してmini prep(60mlで溶出):mini Prep
→Digestion:Digestion
混ぜ表
| double | |
| dH2O | 2 |
| 10×BSA | 1 |
| 10×NE | 1 |
| EcoRI | 0.5 |
| PstI | 0.5 |
| DNA | 5 |
| total | 10 |
Digestion 37℃、30分
プラスミドは33.6ng/μl
PCR:PCR
RBS＋CI
混ぜ表
| Sample No | ① |
| DNA | 1 |
| FW primer | 2.5 |
| VR primer | 2.5 |
| dNTPmix | 5 |
| thermo pol buffer | 5 |
| DNA pol(VENT) | 1 |
| dH2O | 34 |
| TOTAL | 50 |
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