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Team:Chiba/notebook/input/september
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Revision as of 06:01, 25 September 2008
８月の実験ログはこちら
2008.9.1
・Ptet＋RBS＋cIの、Mini Prep産物の濃度チェック。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-の機能チェック。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-,-PcI-GFP-p15A-Cm-をDouble Transformation(BWΔflic)
結果→GFPが発現していた。
→-PcI-GFP-p15A-Cm-が機能していないのでは？
→ターミネーターをつける、pSB1A3にのせかえる。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-のDigestion Check
混ぜ表
| Double | Single | |
| dH2O | 1 | 2 |
| XbaI | 1 | 1 |
| SpeI | 1 | - |
| BSA(×10) | 1 | 1 |
| NEB(×10) | 1 | 1 |
| DNA | 5 | 5 |
| TOTAL | 10 | 10 |
UV照射テスト
・-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-の2plasmid(BW)
・グリストをつついて2ml培養(UV⊕用と、UV⊖用の2本)
・37℃,12h後UV測定(UV⊕:5.21,UV⊖:5.38)
・小さなプレートにLB培地ごと流してUV照射開始。(UVは254nm,UVまでの距離は7.5cm,UV⊖のものは暗所に置いておく。)
・乾かないようにポリエチレン製サランラップで蓋をした。
・UV⊕はUV照射後0min,10min,30min,1h,2h,4h,6h,8に、UV⊖は0h,1h,4h,8hによく攪拌してから、20μl採取。それぞれを
・10^4,10^5希釈し、20μlをプレートに撒いた。
・37℃,12h後にコロニーを数える。
コロニー数
| UV⊕・10^4 | UV⊕・10^5 | UV⊖・10^4 | UV⊖・10^5 | |
| 0min | 423 | 74 | 271 | 156 |
| 10min | 301 | 51 | - | - |
| 30min | 139 | 7 | - | - |
| 1h | 89 | 5 | 1040 | 54 |
| 2h | 5 | 1 | - | -</td> |
