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８月の実験ログはこちら

2008.9.1

・Ptet＋RBS＋cIの、Mini Prep産物の濃度チェック。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-の機能チェック。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-,-PcI-GFP-p15A-Cm-をDouble Transformation(BWΔflic)
結果→GFPが発現していた。
→-PcI-GFP-p15A-Cm-が機能していないのでは？
→ターミネーターをつける、pSB1A3にのせかえる。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-のDigestion Check

混ぜ表

	Double	Single
dH₂O	1	2
XbaI	1	1
SpeI	1	-
BSA(×10)	1	1
NEB(×10)	1	1
DNA	5	5
TOTAL	10	10

UV照射テスト
・-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-の2plasmid(BW)
・グリストをつついて2ml培養(UV⊕用と、UV⊖用の2本)
・37℃,12h後UV測定(UV⊕:5.21,UV⊖:5.38)
・小さなプレートにLB培地ごと流してUV照射開始。(UVは254nm,UVまでの距離は7.5cm,UV⊖のものは暗所に置いておく。)
・乾かないようにポリエチレン製サランラップで蓋をした。
・UV⊕はUV照射後0min,10min,30min,1h,2h,4h,6h,8に、UV⊖は0h,1h,4h,8hによく攪拌してから、20μl採取。それぞれを
・10^4,10^5希釈し、20μlをプレートに撒いた。
・37℃,12h後にコロニーを数える。

コロニー数

	UV+ 10⁴	UV+ 10⁵	UV-10⁴	UV-10⁵
0min	423	74	271	156
10min	301	51	-	-
30min	139	7	-	-
1h	89	5	1040	54
2h	5	1	-	-
4h	2	0	254	50
6h	0	0	-	-
8h	1	0	1155	106

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 <BR>→-PcI-GFP-p15A-Cm-が機能していないのでは？
 <BR>→ターミネーターをつける、pSB1A3にのせかえる。
 <BR>-Ptet-cI-pMB1-Amp-のDigestion Check
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 <table width="200" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
 <td width="257"></td>
-<td>UV⊕・10^4</td><td>UV⊕・10^5</td><td>UV⊖・10^4</td><td>UV⊖・10^5</td>
+<td>UV+ 10<sup>4</sup></td><td>UV+ 10<sup>5</sup></td><td>UV-10<sup>4</sup></td><td>UV-10<sup>5</sup></td>
 <tr>
 <td>0min</td>
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 <tr>
 <td>2h</td>
-<td>5</td><td>1</td><td>-</td></td>-</td>
+<td>5</td><td>1</td><td>-</td><td>-</td>
 </tr>
 <tr>