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Team:Chiba/protocol/phenotype/timedelay/j
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| + | activation of receivers. | ||
| - | === 装置 | + | === 装置 and 試薬 Equipments and Materials === |
| - | *装置 | + | *装置 Equipment |
| - | ** | + | **shaking incubator(37°C,30°C) |
| - | **46 well plate(deep well) | + | **46-well plate(deep well) |
**Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6) | **Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6) | ||
| - | *試薬 | + | *試薬 rMaterials |
**AHL(100uM,5uM,100nM) | **AHL(100uM,5uM,100nM) | ||
**E.coli JW1908 Culture Containing T9002 | **E.coli JW1908 Culture Containing T9002 | ||
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**E.coli JW1908/XL10GOLD Culture Containing S03623 | **E.coli JW1908/XL10GOLD Culture Containing S03623 | ||
| - | === プロトコル === | + | === プロトコル Protocol === |
プレ培（O/N,測定日の前日） | プレ培（O/N,測定日の前日） | ||
*グリセロールストックからpickして、37℃しんとう培養器で一晩培養する(LB-Amp液体培地,2ml,37℃)。 | *グリセロールストックからpickして、37℃しんとう培養器で一晩培養する(LB-Amp液体培地,2ml,37℃)。 | ||
Revision as of 00:01, 26 October 2008
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Contents |
Time-delay check
目的 Purpose
To Confirm that communication using non-endogenous molecules results in slower activation of receivers.
装置 and 試薬 Equipments and Materials
- 装置 Equipment
- shaking incubator(37°C,30°C)
- 46-well plate(deep well)
- Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
- 試薬 rMaterials
- AHL(100uM,5uM,100nM)
- E.coli JW1908 Culture Containing T9002
- E.coli JW1908/XL10GOLD Culture Containing K084007
- E.coli JW1908/XL10GOLD Culture Containing K084008
- E.coli JW1908/XL10GOLD Culture Containing K084009
- E.coli JW1908/XL10GOLD Culture Containing S03623
プロトコル Protocol
プレ培（O/N,測定日の前日）
- グリセロールストックからpickして、37℃しんとう培養器で一晩培養する(LB-Amp液体培地,2ml,37℃)。
翌日
T9002
- 培養液100μLを、40mlのLB-Amp液体培地に加え、37℃で6-8時間しんとう培養する。
- Wash(T9002)-->培養液を50mlファルコンチューブに、10mlずつ分注。
- -->3500rpmで6分間遠心。上澄みを捨てる。
- 新しいLB-Amp培地を10mlずつ加え（1倍希釈）、pipettingにより再懸濁。
- 48 deep well plateに、1mlずつ分注。
others
- 培養液12.5μLを、5mlのLB-Amp液体培地に加え、37℃で6-8時間しんとう培養する。
- Wash-->3500rpmで6分間遠心。上澄みを捨てる。
- -->新しいLB-Amp培地を3mlずつ加え、pipettingにより再懸濁。
-->この操作を二回繰り返す
- 新しいLB-Amp培地を10mlずつ加え（1倍希釈）、pipettingにより再懸濁。
- 48 deep well plateに、所定量分注。
測定
- 96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
- 37℃でしんとう培養
- 2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
- 測定条件
- 測定条件
- 測定前-->shake:On time = 1min,Off time = 10 sec,
- 測定-->integration time = 1000ms
- Beam width:Normal Beam
- Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission)
issues? discussion
蛍光強度がいくつ以上なら目視で確認できるのか-->閾値
