Team:Chiba/Sender experiments/Senders(JW1908) T9002(JW1908)

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Revision as of 15:28, 29 October 2008

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design

Sender

[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 plac+rbs+LasI(BBa_K084007)]

[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084008 plac+rbs+RhlI(BBa_K084008)]

[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084009 plac+rbs+RhlI(LVA)(BBa_K084009)]
[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084010 plac+rbs+CinI(BBa_K0840010)]
[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 ptet+rbs+LuxI(LVA)(BBa_S03623)]

Receiver

[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (Express GFP in response to AHL)]

Method

Transformed Senders into E.coli strains(JW1908) and Receiver into E.coli strain(JW1908).
Inoculated them independently in liquid media. Incubated at 37°C 12h
Mixed them.
Incubated at 37°C or 30°C.
Measured intensity of green fluorescence at regular time intervals.

more details...

Results and Discussion

Reaction temparature:37°C,09/12

センダーの培養液：1000μL、レシーバの培養液：1000μL

Fig.　　
12/09.E.coli strain,senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,37°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

センダーの培養液：100μL、レシーバの培養液：1000μL

Fig.　　
E.coli strain,senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,37°C,Receiver cells/Sender cells = 10.

センダーの培養液：10μL、レシーバの培養液：1000μL

センダーの培養液：1μL、レシーバの培養液：1000μL

CinI+LVAの培養液を混ぜた反応液は、GFPの蛍光強度が上昇しなかった。BBa_K084010が働いていないか、クロストークが起こっていないことが考えられる。
CinI+LVA以外の3種の反応液は,すべて立ち上がりは同じであり(4時間後),LuxI,RhlIとLasIとで,最終到達蛍光強度に差が生じた.

Reaction temparature:37°C

センダーの培養液：500μL、レシーバの培養液：500μL

Fig.　　
E.coli strain,senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,37°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

Left:

立ち上がりの時間,最終蛍光強度ともに,ほとんど差が見られなかった.induction後,AHL濃度はすぐに閾値に達しており,どの反応液もgfpが成熟するのに伴い,蛍光強度が上昇していると考えた.

Right:

LVAtagの効果は見られなかった.LVAによってシンターゼが分解されるよりも速い速度でAHLが合成されていると考えた.

センダーの培養液：100μL、レシーバの培養液：1000μL

Reaction temparature:30°C

センダーの培養液：500μL、レシーバの培養液：500μL

Fig.　　
E.coli strain,Senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,30°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

Left:

Right:

LVAtagの効果は見られなかった.LVAによってシンターゼが分解されるよりも速い速度でAHLが合成されていると考えた.

センダーの培養液：100μL、レシーバの培養液：1000μL

Fig.　　
E.coli strain,senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,30°C,Receiver cells/Sender cells = 100.

Fig.　　
E.coli strain,senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,30°C,Receiver cells/Sender cells = 10.

Left:

Right:

LVAtagの効果は見られなかった.LVAによってシンターゼが分解されるよりも速い速度でAHLが合成されていると考えた.

センダーの培養液：10μL、レシーバの培養液：1000μL

Fig.　　
E.coli strain,senders:JW1908,BBa_T9002:JW1908,30°C,Receiver cells/Sender cells = 100.

Left:

Right:

LVAtagがついている場合,ついていないものより最終到達蛍光強度が小さくなった.LVAによってシンターゼが分解されていた.しかし,立ち上がりの時間は変化しなかった.これは,LVAによるシンターゼよりAHL合成の速度が速いために,AHLがすぐに閾値に達してしまっているためと考えた.閾値を超えると,すぐさまgfpの翻訳が始まり,inductionの2時間後には蛍光強度が上昇し始めた.

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 Left:
-#
+#立ち上がりの時間,最終蛍光強度ともに,ほとんど差が見られなかった.induction後,AHL濃度はすぐに閾値に達しており,どの反応液もgfpが成熟するのに伴い,蛍光強度が上昇していると考えた.
 Right:
 #LVAtagの効果は見られなかった.LVAによってシンターゼが分解されるよりも速い速度でAHLが合成されていると考えた.