Team:Chiba/Experiments:copy number

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==Change Receiver's Copy Number==
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===Design===
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レシーバーのコピーナンバーを減らすことで、thresholdに達するまでの時間を伸ばす。
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（小林）
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===Method===
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*High Copy Receiver[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (AHL Reporter)]
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[[Image:T9002.copy-number-change Chiba.gif]]
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*Medium Copy Receiver
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High Copy ReceiverとMedium Copy Receiverのディレイタイムはfollowing procedureによってanalyzeした。
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#Transformed sender(Ptet-LuxI), high copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-colE1) and Medium copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-p15A) respectively into E coli strains(BD⊿FliC).
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#Inoculated them independently in liquid media. Incubated at 37℃ 12h.
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#Inoculated again in Fresh liquid media upto about OD600=2 at 37℃
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#Washed sender and receivers.
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#Mixed them. (Sender:Receiver=1000μL:1000μL)
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#Incubated at 30°C.
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#Measured intensity of green fluorescence at regular time intervals.(Fluoroskan AscentR FL＆Fluoroskan AscentR　Thermo ELECTRON CORPORATION)
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===Result===

Revision as of 19:21, 29 October 2008

Contents

Copy number of Receiver Plasmid

Receiver copy number chiba.jpg


English:
日本語:レシーバーのコピーナンバーを減らすことで、GFPが確認できるまでの時間を延長する。 コピーナンバーが少なくなれば、LuxRの合成量は減少する。 LuxRの合成量が減少すれば、AHLを受け取るLuxRは従来より減ってしまう。 そのため、プロモーターの活性化は遅くなり、GFPの発現量は減る。 したがって、コピーナンバーが多いレシーバーより、GFPが確認できるまでの時間を延長させることができる。 （杉山）


Plasmid Copynumber

Fig. copynumber

レシーバーのコピーナンバーを変えることで、応答までの時間を変える
コピーナンバーを変えれば、レシーバーによるLuxRの合成量は変化する
AHLを受け取るLuxRが変わるので応答閾値までの時間が変わるのだ
more about Plasmid Copy number

Fig. Time Delay Test

  • クオラムセンシングに関わる遺伝子のベクタープラスミドのコピーナンバーを少なくすることで、遺伝子発現が遅くなる
  • それと同時に、遺伝子発現の最大値自体も少なくなってしまう

more about experimental result

Change Receiver's Copy Number

Design

レシーバーのコピーナンバーを減らすことで、thresholdに達するまでの時間を伸ばす。 （小林）

Method

  • High Copy Receiver[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (AHL Reporter)]

T9002.copy-number-change Chiba.gif


  • Medium Copy Receiver

Low-copy-Receiver Chiba.gif


High Copy ReceiverとMedium Copy Receiverのディレイタイムはfollowing procedureによってanalyzeした。

  1. Transformed sender(Ptet-LuxI), high copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-colE1) and Medium copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-p15A) respectively into E coli strains(BD⊿FliC).
  2. Inoculated them independently in liquid media. Incubated at 37℃ 12h.
  3. Inoculated again in Fresh liquid media upto about OD600=2 at 37℃
  4. Washed sender and receivers.
  5. Mixed them. (Sender:Receiver=1000μL:1000μL)
  6. Incubated at 30°C.
  7. Measured intensity of green fluorescence at regular time intervals.(Fluoroskan AscentR FL＆Fluoroskan AscentR　Thermo ELECTRON CORPORATION)

Result

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