"
Team:Chiba/jk/α
From 2008.igem.org
(→2008.8.30) |
(→2008.8.30) |
||
| Line 440: | Line 440: | ||
<BR>Ligation:'''[[Team:Chiba/protocol/Ligation|Ligation]]''' | <BR>Ligation:'''[[Team:Chiba/protocol/Ligation|Ligation]]''' | ||
| + | <BR>混ぜ表 | ||
| + | <table width="200" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000"> | ||
| + | <td width="257"></td> | ||
| + | <td></td><td>back ground</td> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>dH<sub>2</sub>O</td> | ||
| + | <td>1.4</td><td>8</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>Ligase</td> | ||
| + | <td>1</td><td>1</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>Ligase Buffer</td> | ||
| + | <td>2</td><td>2</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>Vector</td> | ||
| + | <td>1.8</td><td>1</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>Insert</td> | ||
| + | <td>3</td><td>-</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | <tr> | ||
| + | <td>TOTAL</td> | ||
| + | <td>10</td><td>10</td> | ||
| + | </tr> | ||
| + | </table> | ||
Revision as of 05:20, 20 September 2008
入力班のぺーじ。
Contents |
2008.8.20
PCR:PCR
・BBa_J22136(2007)①
・BBa_J22136(2008)②
・BBa_J22141(2007)③
・BBa_J22141(2008)④
・BBa_E0612(2008)⑤
| Sample No | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ |
| DNA tamplate | 1 | 1 | 1 | 1 | >1 |
| FW primer | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| VR primer | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| dNTPmix | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| thermo pol buffer | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| DNA pol(VENT) | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| dH2O | 68 | 68 | 68 | 68 | 68 |
| TOTAL | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
→gel check:Gel Check
| Sample No | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ |
| Sample DNA | 1 | 1 | 1 | 1 | >1 |
| loading dye | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| dH2O | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 |
| Total | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 |
→どれもバンド出ず。
trnsformation:Transformation
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
→BBa_J22141のみコロニーがほとんど生えていなかった。(１個のみ)
2008.8.21
8.20にtransformationしたもの
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
を２ml培養、12h。ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、
さらに1h培養した。
2008.8.22
mini prep:Mini Prep
2ml培養した
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
をミニプレした。
insert check:Digestion
BBa_J06650(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2007)とBBa_R0051(2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。
混ぜ表
| double | simgle | |
| dH2O | 14 | 25 |
| 10×BSA | 7 | 10 |
| 10×NE | 7 | 10 |
| EcoRI | 3.5 | 5 |
| PstI | 3.5 | - |
2008.8.25
BBa_J22136(insert check済み)のグリセロールストックづくり
プレートに生えたコロニーをpickして、試験管で2ml培養(LB-Amp,37℃,12h)
培養した試験管から180μl,LB-Ampを880μlとって、OD=0.495にした。
| OD=0.495培養液 | 0.67μl |
| 60%グリセロール | 0.33μl |
| 20%グリセロールストック(計) | 1.00ml |
2008.8.28
transformation:Transformation
BBa_I7106(2007)
生えてきたコロニーを10ml培養してmini prep(60mlで溶出):mini Prep
→Digestion:Digestion
混ぜ表
| double | |
| dH2O | 2 |
| 10×BSA | 1 |
| 10×NE | 1 |
| EcoRI | 0.5 |
| PstI | 0.5 |
| DNA | 5 |
| TOTAL | 10 |
Digestion 37℃、30分
プラスミドの濃度は33.6ng/μl
PCR:PCR
RBS＋CI
混ぜ表
| DNA | 1 |
| FW primer | 2.5 |
| VR primer | 2.5 |
| dNTPmix | 5 |
| thermo pol buffer | 5 |
| DNA pol(VENT) | 1 |
| dH2O | 34 |
| TOTAL | 50 |
ゲルチェック:Gel Check
| PCR産物 | 1 |
| Dye | 1 |
| dH2O | 4 |
| TOTAL | 6 |
→濃度は33.6ng/μg
ベクターのPCR:PCR
BBa_I7106
混ぜ表
| DNA | 1 |
| FW primer | 5 |
| VR primer | 5 |
| dNTPmix | 10 |
| thermo pol buffer | 10 |
| DNA pol(VENT) | 1 |
| dH2O | 68 |
| TOTAL | 100 |
ゲルチェック:Gel Check
| PCR産物 | 1 |
| Dye | 1 |
| dH2O | 4 |
| TOTAL | 6 |
→バンド出ず。
2008.8.30
Digestion:Digestion
x-RBS-cI-s-p(780bp)
混ぜ表
| double | |
| dH2O | 6 |
| 10×BSA | 10 |
| 10×NE | 10 |
| PstI | 2 |
| XbaI | 2 |
| DNA | 33.6ng/μl×30μl(1μg) |
| TOTAL | 60 |
→30μlゲル抽出
ゲル抽出:Gel Extraction
Zymo:Zymo
5μ抽出,うち1μlをゲルチェック→OK,4μlはLigation用
Digestion:Digestion
-e-x-Ptet-s-p-(PMB1,Amp)(Insert:54bp,Vector:2079bp)
混ぜ表
| double | |
| dH2O | 4 |
| 10×BSA | 10 |
| 10×NE | 10 |
| PstI | 2 |
| SpeI | 4 |
| DNA | 75ng/μl×30μl(2μg) |
| TOTAL | 60 |
→30μlゲル抽出
ゲル抽出:Gel Extraction
→Zymo:Zymo
→SAP:SAP
混ぜ表
| dH2O | 9 |
| DNA | 10 |
| SAP | 1 |
| SAP Buffer | 10 |
| TOTAL | 30 |
5μ抽出,うち1μlをゲルチェック→OK,4μlはLigation用
Ligation:Ligation
混ぜ表
| back ground | ||
| dH2O | 1.4 | 8 |
| Ligase | 1 | 1 |
| Ligase Buffer | 2 | 2 |
| Vector | 1.8 | 1 |
| Insert | 3 | - |
| TOTAL | 10 | 10 |
| ホーム | メンバー紹介 | プロジェクト紹介 | Parts Submitted to the Registry | モデリング | ノート |
|---|
