Team:Chiba/Experiments:copy number

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Revision as of 20:09, 29 October 2008

レシーバーのコピーナンバーを変えることで、応答までの時間を変える
コピーナンバーを変えれば、レシーバーによるLuxRの合成量は変化する
AHLを受け取るLuxRが変わるので応答閾値までの時間が変わると考えた

oriがcolE1のハイコピーベクターにのったBBa_T9002と、oriがP15Aのローコピーベクターに乗ったT9002バリエーションを使用した。

これらを比較することでコピーナンバーを変えることでの影響を調べた。

以下の遺伝子回路を使って、実験を行った。

[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (Express GFP in response to AHL)]

これらのほかにBBa_T9002にはChloramphenicol耐性マーカーを持つ空ベクター、Low copyバリエーションにはAmpicillin耐性マーカーの空ベクターをダブルトランスフォーメーションさせた。

Fig. Time Delay Test

Transformed sender(Ptet-LuxI), high copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-colE1) and Medium copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-p15A) respectively into E coli strains(BD⊿FliC).
Inoculated them independently in liquid media. Incubated at 37°C 12h.
Inoculated again in Fresh liquid media upto about OD600=2 at 37°C
Washed sender and receivers.
Mixed them. (Sender:Receiver=1000μL:1000μL)
Incubated at 30°C.
Measured intensity of green fluorescence at regular time intervals.(Fluoroskan AscentR FL＆Fluoroskan AscentR　Thermo ELECTRON CORPORATION)

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 ===Experiment===
-*High Copy Receiver[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (AHL Reporter)]
+oriがcolE1のハイコピーベクターにのったBBa_T9002と、oriがP15Aのローコピーベクターに乗ったT9002バリエーションを使用した。
-[[Image:T9002.copy-number-change Chiba.gif]]
-*Medium Copy Receiver
-[[Image:Low-copy-Receiver Chiba.gif]]
+これらを比較することでコピーナンバーを変えることでの影響を調べた。
+以下の遺伝子回路を使って、実験を行った。
+===='''Sender'''====
+*AHL autoinucer[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 (BBa_S03623) ]
+[[Image:LuxI-sender Chiba.gif|left|]]<br clear=all>
+===='''Receiver'''====
+*[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (Express GFP in response to AHL)]
+[[Image:High-Copy-Receiver Chiba.gif]]<br clear=all>
+*Low Copy Receiver
+[[Image:Low-Copy-Receiver Chiba.gif]]
+これらのほかにBBa_T9002にはChloramphenicol耐性マーカーを持つ空ベクター、Low copyバリエーションにはAmpicillin耐性マーカーの空ベクターをダブルトランスフォーメーションさせた。
 ===Result & Discussion===