Team:Chiba/Project/Experiments:Receiver Crosstalk

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[[Image:Chiba-U.gif]]
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__NOTOC__
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==Receiver Cross-talk==
[[Image:Chiba project design Receiver.jpg|left]]
[[Image:Chiba project design Receiver.jpg|left]]
English:
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[[Image:R-family-Crosstalk-Lux Chiba.gif|thumb|left|'''Fig.'''Time Delay Test LuxI-LuxR]]
[[Image:R-family-Crosstalk-Lux Chiba.gif|thumb|left|'''Fig.'''Time Delay Test LuxI-LuxR]]
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[[Image:R-family-Crosstalk-Las Chiba.gif|thumb|left|'''Fig.'''Time Delay Test LuxI-LasR]]
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[[Image:R-family-Crosstalk-Las Chiba.gif|thumb|right|'''Fig.'''Time Delay Test LuxI-LasR]]
[[Image:R-family-Crosstalk-Rhl Chiba.gif|thumb|left|'''Fig.'''Time Delay Test LuxI-RhlR]]
[[Image:R-family-Crosstalk-Rhl Chiba.gif|thumb|left|'''Fig.'''Time Delay Test LuxI-RhlR]]
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[[Team:Chiba/AHL Receiver Phase#Quorum Sensing Crosstalk|more about experimental result]]
[[Team:Chiba/AHL Receiver Phase#Quorum Sensing Crosstalk|more about experimental result]]
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=== Demo ~Receivers~ ===
=== Demo ~Receivers~ ===
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--->more about [[Team:Chiba/Demo_experiments:Receivers|Demo experiments detail]]
--->more about [[Team:Chiba/Demo_experiments:Receivers|Demo experiments detail]]
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<!--====Quorum-Sensing Cross-talk====
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[[Image:Receiver switch chiba.jpg|left]]
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[[Image:AHL original pairing chiba.jpg|frame|right|'''Fig.''' original pairing ]]
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English:
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日本語::異なる生物はそれぞれに異なるLuxRタイプのタンパク質を持ち、それぞれアシル鎖の長さ、あるいはC-3位の置換基が異なる種類のAHLに応答する。生物種によって異なるAHLと、それに応答するLuxRタイプのタンパク質は以下の表のよう。
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Pseudomonas aeruginosa由来のRhlR,LasRも3OC6HSLを受け取ることがわかっており、このとき、より高い濃度の3OC6HSLが必要となる<sup>()</sup>.3OC6HSLがゆっくり溜まっていく時、LuxRが最も早く応答し、RhlR、LasRはそれよりも遅く応答する。
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<table width="500" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000" center>
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<tr>
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<td width="200">Strain</td>
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<td width="200">AHL</td>
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<td width="150">LuxR-type protein<td>
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</tr>
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-
<tr>
+
-
<td>P.aeruginosa</td>
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<td>C4HSL</td>
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<td>RhlI</td>
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</tr>
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-
<tr>
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-
<td>V. fisheri</td>
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<td>3OC6HSL</td>
+
-
<td>LuxI</td>
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-
</tr>
+
-
<tr>
+
-
<td>P.aeruginosa</td>
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-
<td>3OC12HSL</td>
+
-
<td>LasI</td>
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</tr>
+
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</table>
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(冨永)
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Revision as of 20:49, 29 October 2008

Chiba-U.gif

Home The Team The Project Parts Submitted to the Registry Reference Notebook Acknowledgements

Receiver Cross-talk

Chiba project design Receiver.jpg

English:

日本語:AHLを合成するSenderだけではなく、AHLを受け取る側のReceiverを変えれば、その応答時間を変えることができる。そこで私たちは、以下のいくつかの方法を考えた。

  1. 一種類のSender（AHL<--LuxI）に対して、由来生物の異なるレシーバタンパク質でそれを受信する.
  2. レシーバータンパク質であるLuxRに変異を入れることで、AHLに対する応答感度を上下させること.
  3. レシーバーのコピーナンバーを変える.



Quorum-Sensing Crosstalk

Fig.　 Crosstalk

クオラムセンシングにおける、レシーバータンパクを変えてクロストークを起こさせる。
センダーを変えたときと同様に、他種生物由来のレシーバーでもAHLに応答することは知られている(1)(2)。
本来の組み合わせとは異なるAHLを受け取るレシーバーの応答時間は遅くなり、遺伝子発現が遅くなる。
more about Receiver phase crosstalk

Fig.Time Delay Test LuxI-LuxR
Fig.Time Delay Test LuxI-LasR
Fig.Time Delay Test LuxI-RhlR


more about experimental result



Demo ~Receivers~

English:
日本語:
固体培地中にセンダー[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623],(Ptet-LuxI) を混ぜ、固体培地表面にレシーバーのコロニーをN.Cフィルターで移す。 センダーの作るAHLは培地中を移動し、表面のレシーバーがAHLを一定濃度感知すればGFPを発現 する。一種のセンダーに対し、様々な種類のレシーバーを用いることで時間差が生じることを確認する。

用いるレシーバーは・・・


・シグナル自体を分解するAiia を利用する

・レシーバーの遺伝子回路を含むプラスミドのコピーナンバーの変化

・レシーバータンパク質であるLuxRに変異を入れる 　　　　　


・確認の仕方
N.Cフィルターをはった個体培地を37°Cで培養し、時間(30min?)ごとにUVをあててGFPが見えるかチェックする。
香取

Results

--->more about Demo experiments detail

--->more about Demo experiments detail



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