Team:Chiba/Project/Experiments:Receiver Crosstalk

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(Difference between revisions)

Revision as of 21:26, 29 October 2008

Receiver Cross-talk

Design

Fig.　 Crosstalk

Table. LuxR family gene Data modified from M.RIVAS et.al. Biol Res 38: 283-297, (2005)

Fig. Comparison of the predicted Lux box. Data modified from A.Fekete et.al. Anal Bioanal Chem 387:455–467,(2007)

クオラムセンシングにおける、レシーバータンパクを変えてクロストークを起こさせる。
センダーを変えたときと同様に、他種生物由来のレシーバーでもAHLに応答することは知られている⁽¹⁾⁽²⁾。
本来の組み合わせとは異なるAHLを受け取るレシーバーの応答時間は遅くなり、遺伝子発現が遅くなる。
異なる生物はそれぞれに異なるLuxRタイプのタンパク質を持ち、それぞれアシル鎖の長さ、あるいはC-3位の置換基が異なる種類のAHLに応答する。生物種によって異なるAHLと、それに応答するLuxRタイプのタンパク質はTableに示すとおりである。 Pseudomonas aeruginosa由来のRhlR,LasRも3OC6HSLを受け取ることがわかっている。

また、LuxR protein familyはLux boxという特定の配列を持ったプロモーター下にある遺伝子の発現を活性化する。(Fig. ) Lux boxも生物種によって配列が異なるが、ほとんど変わらない配列を持っているために違った生物種のLuxR protein familyであっても、AHLが存在下で遺伝子発現を活性化すると考えられる。

more about Receiver phase crosstalk

Result & Discussion

Fig.Time Delay Test LuxI-LuxR

Fig.Time Delay Test LuxI-LasR

Fig.Time Delay Test LuxI-RhlR

more about experimental result

Demo ~Receivers~

English:
日本語:
固体培地中にセンダー[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623],(Ptet-LuxI) を混ぜ、固体培地表面にレシーバーのコロニーをN.Cフィルターで移す。センダーの作るAHLは培地中を移動し、表面のレシーバーがAHLを一定濃度感知すればGFPを発現する。一種のセンダーに対し、様々な種類のレシーバーを用いることで時間差が生じることを確認する。

用いるレシーバーは・・・

・シグナル自体を分解するAiia を利用する

・レシーバーの遺伝子回路を含むプラスミドのコピーナンバーの変化

・レシーバータンパク質であるLuxRに変異を入れる　　　　　

・確認の仕方
N.Cフィルターをはった個体培地を37°Cで培養し、時間(30min?)ごとにUVをあててGFPが見えるかチェックする。
香取

Results

--->more about Demo experiments detail

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 [[Image:Receiver switch chiba.jpg|frame|left|'''Fig.　''' Crosstalk]]<br clear=all>
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+[[Image:Table R chiba.gif|frame|left|'''Table.''' LuxR family gene '''Data modified from M.RIVAS et.al. Biol Res 38: 283-297, (2005)''']]
+[[Image:Lux box Chiba.jpg|frame|left|'''Fig.''' Comparison of the predicted Lux box. '''Data modified from A.Fekete et.al. Anal Bioanal Chem 387:455–467,(2007)''']]
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 クオラムセンシングにおける、レシーバータンパクを変えてクロストークを起こさせる。<br>
 センダーを変えたときと同様に、他種生物由来のレシーバーでもAHLに応答することは知られている[[Team:Chiba/Project#references|<sup>(1)</sup>]][[Team:Chiba/Project#references|<sup>(2)</sup>]]。<br>
 本来の組み合わせとは異なるAHLを受け取るレシーバーの応答時間は遅くなり、遺伝子発現が遅くなる。
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+異なる生物はそれぞれに異なるLuxRタイプのタンパク質を持ち、それぞれアシル鎖の長さ、あるいはC-3位の置換基が異なる種類のAHLに応答する。生物種によって異なるAHLと、それに応答するLuxRタイプのタンパク質はTableに示すとおりである。
+Pseudomonas aeruginosa由来のRhlR,LasRも3OC6HSLを受け取ることがわかっている。
+<br clear=all>
+また、LuxR protein familyはLux boxという特定の配列を持ったプロモーター下にある遺伝子の発現を活性化する。(Fig. )
+Lux boxも生物種によって配列が異なるが、ほとんど変わらない配列を持っているために違った生物種のLuxR protein familyであっても、AHLが存在下で遺伝子発現を活性化すると考えられる。
+<br clear=all>
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