Team:Chiba/Sender experiments/Senders(XL10Gold) T9002(JW1908)

From 2008.igem.org

Revision as of 03:39, 30 October 2008

Results

Reaction temparature:37°C

• Sender culture：500μL,Receiver：500μL

Fig.1　　
E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,37°C

Fig.2　　
E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,37°C

Fig.3　　
E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,37°C

• left
  • result
    • Cultures containing cells transformed with LuxI gene([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012])and cells transformed with RhlI gene([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084008 BBa_K084008]) express gfp and fluorescence intensity was reached to 500.Cultures containing cells transformed with LasI gene([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]) weakly expressed gfp,and fluorescence intensity was not reached to a significant level.
  • Discussion
    • We concluded that LasI gene([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]) was not work well.

• middle
  • Results
    • Fluorescence intensity of the culture containing cells transformed with LuxI gene([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]) was lower than that of the cultures containing the cells transformed with LVA LuxI-LVA gene([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084014 BBa_K084014]).The difference of maximum fluorescence intesity between the two cultures was 200.８時間後の！
    • 蛍光強度の差はあるが、あまり時間差は見られなかった。
  • 考察
    • タグが付くことで蛍光の発現抑制は起きているが、この条件において時差の効果はあまりないようである。

• 右
  • 結果
    • RhlI([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084008 BBa_K084008])とタグ付きRhlI+LVA([http://partsregistry.org/Part:BBa_K084009 BBa_K084009])は全く同じ蛍光強度の上がり方で最終的な値までほぼ等しかった。
  • 考察
    • LuxIの時とくらべてあまりにもタグの効果が見られないため、タグ自体が機能しているのか疑問である。
    • タグ自体が機能していないのでないならば、この条件におけるRhlIのタグ効果はないと考えられる。

Fig.4　　
E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,37°C,Receiver cells/Sender cells = 1.0917

Fig.5　　
E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,37°C,Receiver cells/Sender cells = 1.0917

Reaction temparature:30°C

• センダーの培養液：500μL、レシーバの培養液：500μL

Fig.6　　
E.coli strain,BBa_K084007:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,30°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

Fig.7　　
E.coli strain,BBa_K084007:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,30°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

• 左
  • 結果　
    • 蛍光強度はRhl,LuxI+LVA,LasIの順に高かった。
    • LuxI,RhlIとLasIは蛍光強度200に達するまでの時間差は約2時間だった
  • 考察
    • 30°CではRhlIの活性のほうがLuxIより高い。もしくは、LVAの効果が出ている。その場合、右のグラフ

　　　のLVA自体に問題があると考えられる。

• 右
  • 結果
    • RhlI+LVAとRhlIでは値はほぼ同じだった
  • 考察
    • LVAが働いていないか、働いていたとしてもこの条件だとAHLシンターゼの合成速度のほうが

　　かなり大きいと考えられる

Reaction temparature:25°C

センダーの培養液：500μL、レシーバの培養液：500μL

Fig.8
E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,25°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

Fig.9
　E.coli strain,Senders:XL10Gold,BBa_T9002:JW1908,25°C,Receiver cells/Sender cells = 1.

• Left:
  • 結果
    • 30°C,37°Cの実験時に比べて蛍光強度が極端に低く,ネガコンと差がほとんどなかった.
    • LuxI,RhlIに比べてLasIにおける最終形高強度は約1/2と低いものであった。
  • 考察
    • 蛍光強度が極端に下がったのは30°C,37°Cで行った実験と比べ温度が低いため活性が落ちたためと考えられる。
    • またそれだけではなく静置して行ったためSenderとReceiverがよく混ざらず、その結果GFPの発現量が大幅に減少した可能性も考えられる。

• Right:
  • 結果
    • RhlIにLVAtagのついているものは,LVAtagのついていないものに比べて最大蛍光強度が小さかった.
  • 考察
    • LVAtagはこの実験条件では有効であるらしい。

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