Team:Chiba/jk/α

From 2008.igem.org

(Difference between revisions)

Revision as of 03:13, 20 September 2008

入力班のぺーじ。

2008.8.20

PCR:PCR
・BBa_J22136(2007)①
・BBa_J22136(2008)②
・BBa_J22141(2007)③
・BBa_J22141(2008)④
・BBa_E0612(2008)⑤

>

Sample No	①	②	③	④	⑤
DNA tamplate	1	1	1	1	1
FW primer	5	5	5	5	5
VR primer	5	5	5	5	5
dNTPmix	10	10	10	10	10
thermo pol buffer	10	10	10	10	10
DNA pol(VENT)	1	1	1	1	1
dH2O	68	68	68	68	68
TOTAL	100	100	100	100	100

→gel check:Gel Check

>

Sample No	①	②	③	④	⑤
Sample DNA	1	1	1	1	1
loading dye	1	1	1	1	1
dH₂O	4	4	4	4	4
Total	6	6	6	6	6

→どれもバンド出ず。

trnsformation:Transformation

・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)

→BBa_J22141のみコロニーがほとんど生えていなかった。(１個のみ)

2008.8.21

8.20にtransformationしたもの
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007) を２ml培養、12h。ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、さらに1h培養した。

2008.8.22

mini prep:Mini Prep
2ml培養した
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
をミニプレした。

insert check:Digestion

BBa_J06650(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2007)とBBa_R0051(2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。

混ぜ表

	double	simgle
dH₂O	14	25
10×BSA	7	10
10×NE	7	10
EcoRI	3.5	5
PstI	3.5	-

2008.8.25

BBa_J22136(insert check済み)のグリセロールストックづくり

プレートに生えたコロニーをpickして、試験管で2ml培養(LB-Amp,37℃,12h)
培養した試験管から180μl,LB-Ampを880μlとって、OD=0.495にした。

OD=0.495培養液	0.67μl
60%グリセロール	0.33μl
20%グリセロールストック(計)	1.00ml

2008.8.28

transformation:Transformation
BBa_I7106(2007) 生えてきたコロニーを10ml培養してmini prep(60mlで溶出):mini Prep
→Digestion:Digestion
混ぜ表

	double
dH₂O	2
10×BSA	1
10×NE	1
EcoRI	0.5
PstI	0.5
DNA	5
TOTAL	10

Digestion 37℃、30分
プラスミドの濃度は33.6ng/μl

PCR:PCR
RBS＋CI
混ぜ表


DNA	1
FW primer	2.5
VR primer	2.5
dNTPmix	5
thermo pol buffer	5
DNA pol(VENT)	1
dH2O	34
TOTAL	50

ゲルチェック:Gel Check

PCR産物	1
Dye	1
dH₂O	4
TOTAL	6

→濃度は33.6ng/μg

ベクターのPCR:PCR
BBa_I7106
混ぜ表


DNA	1
FW primer	5
VR primer	5
dNTPmix	10
thermo pol buffer	10
DNA pol(VENT)	1
dH2O	68
TOTAL	100

ゲルチェック:Gel Check

PCR産物	1
Dye	1
dH₂O	4
TOTAL	6

→バンド出ず。

2008.8.30

Digestion:Digestion
x-RBS-cI-s-p(780bp)
混ぜ表

	double
dH₂O	6
10×BSA	10
10×NE	10
PstI	2
XbaI	2
DNA	33.6ng/μl×30μl(1μg)
TOTAL	60

-e-x-Ptet-s-p-(PMB1,Amp)(Insert:54bp,Vector:2079bp)
混ぜ表

	double
dH₂O	4
10×BSA	10
10×NE	10
PstI	2
SpeI	2
DNA	33.6ng/μl×30μl(1μg)
TOTAL	60

ゲル抽出:Gel Extraction

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@@ Line 334: / Line 334: @@
 == 2008.8.30 ==
 <BR>Digestion:'''[[Team:Chiba/protocol/digestion|Digestion]]'''
+<BR>x-RBS-cI-s-p(780bp)
 <BR>混ぜ表
 <table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
@@ Line 368: / Line 369: @@
 </table>
-<BR>ゲル抽出
+<BR>-e-x-Ptet-s-p-(PMB1,Amp)(Insert:54bp,Vector:2079bp)
+<BR>混ぜ表
+<table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
+<td width="257"></td>
+<td>double</td>
+<tr>
+<td>dH<sub>2</sub>O</td>
+<td>4</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>10×BSA</td>
+<td>10</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>10×NE</td>
+<td>10</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>PstI</td>
+<td>2</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>SpeI</td>
+<td>2</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>DNA</td>
+<td>33.6ng/μl×30μl(1μg)</td>
+</tr>
+<tr>
+<td>TOTAL</td>
+<td>60</td>
+</tr>
+</table>
+<BR>ゲル抽出:'''[[Team:Chiba/protocol/gel extraction|Gel Extraction]]'''
 {| style="color:green;background-color:Maroon" cellpadding="3" cellspacing="3" border="1" bordercolor="white" width="100%" align="center"