Team:Chiba/jk/α

From 2008.igem.org

(Difference between revisions)
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== 2008.8.30 ==
== 2008.8.30 ==
<BR>Digestion:'''[[Team:Chiba/protocol/digestion|Digestion]]'''
<BR>Digestion:'''[[Team:Chiba/protocol/digestion|Digestion]]'''
 +
<BR>x-RBS-cI-s-p(780bp)
<BR>混ぜ表
<BR>混ぜ表
<table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
<table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
Line 368: Line 369:
</table>
</table>
-
<BR>ゲル抽出
+
<BR>-e-x-Ptet-s-p-(PMB1,Amp)(Insert:54bp,Vector:2079bp)
 +
<BR>混ぜ表
 +
<table width="150" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
 +
<td width="257"></td>
 +
<td>double</td>
 +
<tr>
 +
<td>dH<sub>2</sub>O</td>
 +
<td>4</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>10×BSA</td>
 +
<td>10</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>10×NE</td>
 +
<td>10</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>PstI</td>
 +
<td>2</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>SpeI</td>
 +
<td>2</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>DNA</td>
 +
<td>33.6ng/μl×30μl(1μg)</td>
 +
</tr>
 +
<tr>
 +
<td>TOTAL</td>
 +
<td>60</td>
 +
</tr>
 +
</table>
 +
 
 +
 
 +
 
 +
<BR>ゲル抽出:'''[[Team:Chiba/protocol/gel extraction|Gel Extraction]]'''
 +
 
 +
 
{| style="color:green;background-color:Maroon" cellpadding="3" cellspacing="3" border="1" bordercolor="white" width="100%" align="center"
{| style="color:green;background-color:Maroon" cellpadding="3" cellspacing="3" border="1" bordercolor="white" width="100%" align="center"

Revision as of 03:13, 20 September 2008

入力班のぺーじ。


Contents

2008.8.20

PCR:PCR
・BBa_J22136(2007)①
・BBa_J22136(2008)②
・BBa_J22141(2007)③
・BBa_J22141(2008)④
・BBa_E0612(2008)⑤

>
Sample No
DNA tamplate 11111
FW primer 55555
VR primer 55555
dNTPmix 1010101010
thermo pol buffer 1010101010
DNA pol(VENT) 11111
dH2O 6868686868
TOTAL 100100100100100


→gel check:Gel Check

>
Sample No
Sample DNA 11111
loading dye 11111
dH2O 44444
Total 66666

→どれもバンド出ず。




trnsformation:Transformation


・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)

→BBa_J22141のみコロニーがほとんど生えていなかった。(1個のみ)

2008.8.21

8.20にtransformationしたもの
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007) を2ml培養、12h。ただしコロニーが1個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、 さらに1h培養した。

2008.8.22

mini prep:Mini Prep
2ml培養した
・BBa_R0051(2007)
・BBa_R0051(2006)
・BBa_J06650(2007)
・BBa_J06650(2006)
・BBa_J22136(2007)
・BBa_J22141(2007)
をミニプレした。


insert check:Digestion


BBa_J06650(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2007)とBBa_R0051(2006)はsingleのみ、ほかはsingleとdoubleの両方。

混ぜ表

doublesimgle
dH2O 1425
10×BSA 710
10×NE 710
EcoRI 3.55
PstI 3.5-

2008.8.25

BBa_J22136(insert check済み)のグリセロールストックづくり

プレートに生えたコロニーをpickして、試験管で2ml培養(LB-Amp,37℃,12h)
培養した試験管から180μl,LB-Ampを880μlとって、OD=0.495にした。


OD=0.495培養液 0.67μl
60%グリセロール 0.33μl
20%グリセロールストック(計) 1.00ml

2008.8.28

transformation:Transformation
BBa_I7106(2007) 生えてきたコロニーを10ml培養してmini prep(60mlで溶出):mini Prep
→Digestion:Digestion
混ぜ表

double
dH2O 2
10×BSA 1
10×NE 1
EcoRI 0.5
PstI 0.5
DNA 5
TOTAL 10

Digestion 37℃、30分
プラスミドの濃度は33.6ng/μl



PCR:PCR
RBS+CI
混ぜ表

DNA 1
FW primer 2.5
VR primer 2.5
dNTPmix 5
thermo pol buffer 5
DNA pol(VENT) 1
dH2O 34
TOTAL 50


ゲルチェック:Gel Check


PCR産物 1
Dye 1
dH2O 4
TOTAL 6

→濃度は33.6ng/μg


ベクターのPCR:PCR
BBa_I7106
混ぜ表

DNA 1
FW primer 5
VR primer 5
dNTPmix 10
thermo pol buffer 10
DNA pol(VENT) 1
dH2O 68
TOTAL 100


ゲルチェック:Gel Check


PCR産物 1
Dye 1
dH2O 4
TOTAL 6

→バンド出ず。

2008.8.30


Digestion:Digestion
x-RBS-cI-s-p(780bp)
混ぜ表

double
dH2O 6
10×BSA 10
10×NE 10
PstI 2
XbaI 2
DNA 33.6ng/μl×30μl(1μg)
TOTAL 60


-e-x-Ptet-s-p-(PMB1,Amp)(Insert:54bp,Vector:2079bp)
混ぜ表

double
dH2O 4
10×BSA 10
10×NE 10
PstI 2
SpeI 2
DNA 33.6ng/μl×30μl(1μg)
TOTAL 60



ゲル抽出:Gel Extraction


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