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Team:Chiba/jk/γ/Trl
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:M9またはPBSで培養し、IPTG,AHLを加え計測する。 | :M9またはPBSで培養し、IPTG,AHLを加え計測する。 | ||
| - | *計測 | + | *計測(measurements) |
| - | : | + | 37°Cでしんとう培養 <br> |
| - | : | + | 96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。<br> |
| + | 2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。 <br> | ||
| + | Beam width:Normal Beam <br> | ||
| + | Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission) <br> | ||
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| + | Incubate testing cultures with shaking at 37°C. <br> | ||
| + | After some intervals,aliqupte 100μL of testing cultures into a 96-well plate(shallow well).<br> | ||
| + | Measure fluorescence intensity. <br> | ||
| + | conditions <br> | ||
| + | Beam width:Normal Beam<br> | ||
| + | Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission)<br> | ||
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Revision as of 05:38, 29 October 2008
Contents |
Time Responce Liquid
purpose
インダクションをかけてからいち早く、確認できる出力を見つけること
To find the earliest output gene after induction
装置&試薬(apparatus&reagents)
装置（apparatus)
- しんとう培養器(shaking incubator)(37℃,30℃)
- 48 well plate(deep well)
- Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
試薬(reagents)
- AHL(100uM,5uM,100nM)
- IPTG(100nM)
- X-gal
- M9
- PBS
Protocol
- pre培養(Day,1:pre culture)
- LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし３７℃で12時間培養(48穴Deep Well)
- pick colony(E.coli) from solid culture medium
- into LB culture fluid(2 ml)
- cultivate for 12hours in shaking incubator(37℃)
- 本培(Day,2:main culture)
- measure OD values and dilution with LB culture fluid to 0.01(OD values)
- cultivate to 1.0(OD values)
- wash with physiological saline (2.0min 8,000rpm)x2
- culture in M9 or PBS and add IPTG or AHL
- measure OD values ,fluorecent intensity
- judge whether we can see the color
- ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養
- OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2
- M9またはPBSで培養し、IPTG,AHLを加え計測する。
- 計測(measurements)
37°Cでしんとう培養
96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
Beam width:Normal Beam
Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission)
Incubate testing cultures with shaking at 37°C.
After some intervals,aliqupte 100μL of testing cultures into a 96-well plate(shallow well).
Measure fluorescence intensity.
conditions
Beam width:Normal Beam
Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission)
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Result
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