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From 2008.igem.org

８月の実験ログはこちら

2008.9.1

・Ptet＋RBS＋cIの、Mini Prep産物の濃度チェック。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-の機能チェック。
-Ptet-cI-pMB1-Amp-,-PcI-GFP-p15A-Cm-をDouble Transformation(BWΔflic)
結果→GFPが発現していた。
→-PcI-GFP-p15A-Cm-が機能していないのでは？
→ターミネーターをつける、pSB1A3にのせかえる。

-Ptet-cI-pMB1-Amp-のDigestion Check

混ぜ表

	Double	Single
dH2O	1	2
XbaI	1	1
SpeI	1	-
BSA(×10)	1	1
NEB(×10)	1	1
DNA	5	5
TOTAL	10	10

UV照射テスト
・-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-の2plasmid(BW)
・グリストをつついて2ml培養(UV⊕用と、UV⊖用の2本)
・37℃,12h後UV測定(UV⊕:5.21,UV⊖:5.38)
・小さなプレートにLB培地ごと流してUV照射開始。(UVは254nm,UVまでの距離は7.5cm,UV⊖のものは暗所に置いておく。)
・乾かないようにポリエチレン製サランラップで蓋をした。
・UV⊕はUV照射後0min,10min,30min,1h,2h,4h,6h,8に、UV⊖は0h,1h,4h,8hによく攪拌してから、20μl採取。それぞれを
・10^4,10^5希釈し、20μlをプレートに撒いた。
・37℃,12h後にコロニーを数える。

コロニー数

--</td> <tr> <td>4h</td> <td>2</td><td>0</td><td>254</td><td>50</td> </tr> <tr> <td>6h</td> <td>0</td><td>0</td><td>-</td><td>-</td> </tr> <tr> <td>8h</td> <td>1</td><td>0</td><td>1155</td><td>106</td> </tr> </table>

	UV⊕・10^4	UV⊕・10^5	UV⊖・10^4	UV⊖・10^5
0min	423	74	271	156
10min	301	51	-	-
30min	139	7	-	-
1h	89	5	1040	54
2h	5	1