From 2008.igem.org

Revision as of 13:41, 29 October 2008 by Yoshimi (Talk | contribs)

(diff) ← Older revision | Latest revision (diff) | Newer revision → (diff)

Home	The Team	The Project	Parts Submitted to the Registry	Reference	Notebook	Acknowledgements

Demo Experiment ~Senders~

Method

プレ培養
1. 以下のグリストを各培養液2μL中にPick。
  1. LB-Amp, [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002], (BW)
  2. LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0161 LuxI(no LVA)]), (XL10G)
  3. LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0178 LasI(no LVA)]), (XL10G)
2. 37°Cでしんとう培養。12h
本培養
1. プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
  1. LB-Amp, [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]
  2. LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0161 LuxI(no LVA)]), [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0178 LasI(no LVA)])
2. 37°Cでしんとう培養。4～5h。
Wash
1. 遠心管50μL中に10μLずつ培養液を移す。
2. 20°C,3600rpmで6min遠心。

Results

結果は以下の通り。

*緑部分：LuxI　*赤部分：LasI

開始点

LuxIでGFP確認

LasIでもGFP確認

1枚目の写真は開始点。2枚目はLuxIの部分だけGFPを肉眼（蛍光灯光）で確認。３枚目はLuxIとLasI両方を確認したものです。

（それぞれ０時間、4時間、8時間後の映像。液量が100μLと少ないため、今までの実験（1000μL）での結果よりもGFP発現に時間がかかった。・・・コレ書かない方がいいのかなあ。）

Demo Experiment ~Receivers~

method

・receiver:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (BW)をLB-Amp 2mLで12hプレ培養し、colonyが1000位になるようにプレートに撒く。（プレート①）
・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。（プレート②）
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取

result

菌数ふり実験

菌数比1:1

                   0h                      0.5h                         1.5h

菌数比1:100

                  0h                        0.5h                       1.5h                     2.0h

菌数比1:1000

                0h                    0.5h              1.5h             2.0h                2.5h

いろんなレシーバー実験

>Back to the project page

Home	The Team	The Project	Parts Submitted to the Registry	Notebook

Team:Chiba/Demo experiments