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Team:Chiba/Experiments:copy number
From 2008.igem.org
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Copy number of Receiver Plasmid
English:
日本語:レシーバーのコピーナンバーを減らすことで、GFPが確認できるまでの時間を延長する。
コピーナンバーが少なくなれば、LuxRの合成量は減少する。
LuxRの合成量が減少すれば、AHLを受け取るLuxRは従来より減ってしまう。
そのため、プロモーターの活性化は遅くなり、GFPの発現量は減る。
したがって、コピーナンバーが多いレシーバーより、GFPが確認できるまでの時間を延長させることができる。
（杉山）
Plasmid Copynumber
Fig. copynumber
レシーバーのコピーナンバーを変えることで、応答までの時間を変える
コピーナンバーを変えれば、レシーバーによるLuxRの合成量は変化する
AHLを受け取るLuxRが変わるので応答閾値までの時間が変わるのだ
more about Plasmid Copy number
- クオラムセンシングに関わる遺伝子のベクタープラスミドのコピーナンバーを少なくすることで、遺伝子発現が遅くなる
- それと同時に、遺伝子発現の最大値自体も少なくなってしまう
more about experimental result
Change Receiver's Copy Number
Design
レシーバーのコピーナンバーを減らすことで、thresholdに達するまでの時間を伸ばす。 （小林）
Method
- High Copy Receiver[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002 (AHL Reporter)]
- Medium Copy Receiver
High Copy ReceiverとMedium Copy Receiverのディレイタイムはfollowing procedureによってanalyzeした。
- Transformed sender(Ptet-LuxI), high copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-colE1) and Medium copy receiver(Ptet-LuxR-Plux-GFP-p15A) respectively into E coli strains(BD⊿FliC).
- Inoculated them independently in liquid media. Incubated at 37℃ 12h.
- Inoculated again in Fresh liquid media upto about OD600=2 at 37℃
- Washed sender and receivers.
- Mixed them. (Sender:Receiver=1000μL:1000μL)
- Incubated at 30°C.
- Measured intensity of green fluorescence at regular time intervals.(Fluoroskan AscentR FL＆Fluoroskan AscentR Thermo ELECTRON CORPORATION)
