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Team:Chiba/Reporter
From 2008.igem.org
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==Experiment== | ==Experiment== | ||
| - | + | 大腸菌:XL10G | |
*Luciferase | *Luciferase | ||
:*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J52008 BBa_J52008]+[http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620 BBa_F2620] | :*[http://partsregistry.org/Part:BBa_J52008 BBa_J52008]+[http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620 BBa_F2620] | ||
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*β-gal (X-gal assay) | *β-gal (X-gal assay) | ||
:*PUC19(plac-LacZ) | :*PUC19(plac-LacZ) | ||
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| + | *装置 Equipment | ||
| + | :shaking incubator(37°C,30°C) | ||
| + | ::Innova 4200 Benchtop or Floor-Stackable Incubator Shaker(37°C) | ||
| + | :46-well plate(deep well) | ||
| + | :96-well plate(deep well) | ||
| + | :Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6) | ||
| + | :Beckman Allegratm X-12R Centrifuga(Beckman Coulter) | ||
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*固体編 | *固体編 | ||
| - | + | 固体培地(pLacであれば0.2%グルコース入り)にまく<br> | |
| - | 固体培地(pLacであれば0.2%グルコース入り) | + | |
コロニーを新しい固体培地(pLacであればIPTG, ptetであればAHL, LacZならばIPTGとX-gal）にコロニーリフトする＝スタート<br> | コロニーを新しい固体培地(pLacであればIPTG, ptetであればAHL, LacZならばIPTGとX-gal）にコロニーリフトする＝スタート<br> | ||
| - | 37& | + | 37°Cのしんとう培養器で培養<br> |
30分ごとに目視で確認できるか観察<br> | 30分ごとに目視で確認できるか観察<br> | ||
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プレ培<br> | プレ培<br> | ||
コロニーを固体培地からピックし、LB培養液2ml（pLacであれば0.2%グルコース入り）で12時間培養(37°C)<br> | コロニーを固体培地からピックし、LB培養液2ml（pLacであれば0.2%グルコース入り）で12時間培養(37°C)<br> | ||
| + | 本培<br> | ||
| + | OD値を計測して、菌数を合わせるため培養液を1/200に希釈する。<br> | ||
| + | OD=1.00くらいになるまで37°Cで培養<br> | ||
==Result== | ==Result== | ||
Revision as of 12:50, 29 October 2008
| Home | The Team | The Project | Parts Submitted to the Registry | Reference | Notebook | Acknowledgements |
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Reporter
レスポンスの早いレポーターを選ぶことが目的
- Luciferase
- 蛍光たんぱく
- β-gal (X-gal assay)
Experiment
大腸菌:XL10G
- Luciferase
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_J52008 BBa_J52008]+[http://partsregistry.org/Part:BBa_F2620 BBa_F2620]
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_J32007 BBa_J32007]
- 蛍光たんぱく
- GFP
- pGFPuv
- YFP
- [http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_K084003 BBa_K084003]
- mCherry
- ptet-mCherry
- β-gal (X-gal assay)
- PUC19(plac-LacZ)
- 装置 Equipment
- shaking incubator(37°C,30°C)
- Innova 4200 Benchtop or Floor-Stackable Incubator Shaker(37°C)
- 46-well plate(deep well)
- 96-well plate(deep well)
- Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
- Beckman Allegratm X-12R Centrifuga(Beckman Coulter)
- 固体編
固体培地(pLacであれば0.2%グルコース入り)にまく
コロニーを新しい固体培地(pLacであればIPTG, ptetであればAHL, LacZならばIPTGとX-gal）にコロニーリフトする＝スタート
37°Cのしんとう培養器で培養
30分ごとに目視で確認できるか観察
- 液体編
プレ培
コロニーを固体培地からピックし、LB培養液2ml（pLacであれば0.2%グルコース入り）で12時間培養(37°C)
本培
OD値を計測して、菌数を合わせるため培養液を1/200に希釈する。
OD=1.00くらいになるまで37°Cで培養
Result
Conclusion
このプロジェクトでは、発現するまでの時間を変えることが目的である
分解されやすいLuciferineやX-galを基質とするLuciferaseやβ-galでは、時間がたつごとに基質濃度が下がり、出力までの時間が長くなってしまう
そのため、基質のいらない蛍光タンパク質が適している。
基質も合成するLuxCDABEを発現させると、レスポンスが早くなる可能性がある。
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