Team:Chiba/jk/γ/Trl

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Revision as of 12:42, 23 October 2008

インダクションをかけてからいち早く、確認できる出力を見つけること
To find the earliest output gene after induction

装置（apparatus)

試薬(reagents)

ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養

OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2

M9またはPBSで培養し、IPTG,AHLを加え計測する。

0min,30min,60min,90min,120min,,,,,240minまで蛍光リーダー、OD値計測

また、肉眼で確認

Result

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 ==Time Responce Liquid==
-<br> '''装置&試薬'''
+===purpose===
-*装置
+<br>インダクションをかけてからいち早く、確認できる出力を見つけること
-:*46穴(Deep Well)
+<br>To find the earliest output gene after induction
-:*しんとうき
-:*OD測定値
-:*96穴Plate
-:*蛍光リーダー
-*試薬
-:*IPTG(pLacの場合)
-:*AHL(pLuxの場合)
-:*X-gal(LacZの場合)
-:*M9
-:*PBS
-<br>'''プロトコル'''
+===装置&試薬(apparatus&reagents)===
-*Pre培
+'''装置（apparatus)'''
-:LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし３７℃で12時間培養(48穴Deep Well)
+*しんとう培養器(shaking incubator)(37℃,30℃)
-*本培
+*48 well plate(deep well)
+*Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
+'''試薬(reagents)'''
+*AHL(100uM,5uM,100nM)
+*IPTG(100nM)
+*X-gal
+*M9
+*PBS
+===Protocol===
+*pre培養(Day,1:pre culture)
+:*LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし３７℃で12時間培養(48穴Deep Well)
+:*pick colony(E.coli) from solid culture medium
+:*into LB culture fluid(2 ml)
+:*cultivate for 12hours in shaking incubator(37℃)
+*本培(Day,2:main culture)
+:*measure OD values and dilution with LB culture fluid to 0.01(OD values)
+:*cultivate to 1.0(OD values)
+:*wash with physiological saline (2.0min 8,000rpm)x2
 :ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養
 :OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2