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Team:Chiba/jk/γ/Trl
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<br>To find the earliest output gene after induction | <br>To find the earliest output gene after induction | ||
Revision as of 05:30, 29 October 2008
Contents |
Time Responce Liquid
purpose
インダクションをかけてからいち早く、確認できる出力を見つけること
To find the earliest output gene after induction
装置&試薬(apparatus&reagents)
装置（apparatus)
- しんとう培養器(shaking incubator)(37℃,30℃)
- 48 well plate(deep well)
- Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
試薬(reagents)
- AHL(100uM,5uM,100nM)
- IPTG(100nM)
- X-gal
- M9
- PBS
===比較対照
Protocol
- pre培養(Day,1:pre culture)
- LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし３７℃で12時間培養(48穴Deep Well)
- pick colony(E.coli) from solid culture medium
- into LB culture fluid(2 ml)
- cultivate for 12hours in shaking incubator(37℃)
- 本培(Day,2:main culture)
- measure OD values and dilution with LB culture fluid to 0.01(OD values)
- cultivate to 1.0(OD values)
- wash with physiological saline (2.0min 8,000rpm)x2
- culture in M9 or PBS and add IPTG or AHL
- measure OD values ,fluorecent intensity
- judge whether we can see the color
- ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養
- OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2
- M9またはPBSで培養し、IPTG,AHLを加え計測する。
- 計測
- 0min,30min,60min,90min,120min,,,,,240minまで蛍光リーダー、OD値計測
- また、肉眼で確認
Result
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