Team:Chiba/jk/γ/Trl
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- | * | + | '''装置(apparatus)''' |
- | :LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし37℃で12時間培養(48穴Deep Well) | + | *しんとう培養器(shaking incubator)(37℃,30℃) |
- | *本培 | + | *48 well plate(deep well) |
+ | *Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6) | ||
+ | '''試薬(reagents)''' | ||
+ | *AHL(100uM,5uM,100nM) | ||
+ | *IPTG(100nM) | ||
+ | *X-gal | ||
+ | *M9 | ||
+ | *PBS | ||
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+ | ===Protocol=== | ||
+ | *pre培養(Day,1:pre culture) | ||
+ | :*LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし37℃で12時間培養(48穴Deep Well) | ||
+ | :*pick colony(E.coli) from solid culture medium | ||
+ | :*into LB culture fluid(2 ml) | ||
+ | :*cultivate for 12hours in shaking incubator(37℃) | ||
+ | *本培(Day,2:main culture) | ||
+ | :*measure OD values and dilution with LB culture fluid to 0.01(OD values) | ||
+ | :*cultivate to 1.0(OD values) | ||
+ | :*wash with physiological saline (2.0min 8,000rpm)x2 | ||
:ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養 | :ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養 | ||
:OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2 | :OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2 |
Revision as of 12:42, 23 October 2008
Contents |
Time Responce Liquid
purpose
インダクションをかけてからいち早く、確認できる出力を見つけること
To find the earliest output gene after induction
装置&試薬(apparatus&reagents)
装置(apparatus)
- しんとう培養器(shaking incubator)(37℃,30℃)
- 48 well plate(deep well)
- Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
試薬(reagents)
- AHL(100uM,5uM,100nM)
- IPTG(100nM)
- X-gal
- M9
- PBS
Protocol
- pre培養(Day,1:pre culture)
- LB培養液(2ml)に固体培地から大腸菌をpickし37℃で12時間培養(48穴Deep Well)
- pick colony(E.coli) from solid culture medium
- into LB culture fluid(2 ml)
- cultivate for 12hours in shaking incubator(37℃)
- 本培(Day,2:main culture)
- measure OD values and dilution with LB culture fluid to 0.01(OD values)
- cultivate to 1.0(OD values)
- wash with physiological saline (2.0min 8,000rpm)x2
- ODを計測し1/200に希釈しOD=0.01から1.0になるまで培養
- OD=1.0になったら生理食塩水でwash(2.0min 8,000rpm)x2
- M9またはPBSで培養し、IPTG,AHLを加え計測する。
- 計測
- 0min,30min,60min,90min,120min,,,,,240minまで蛍光リーダー、OD値計測
- また、肉眼で確認
Result
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