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Team:Chiba/jk
From 2008.igem.org
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*ベクターの乗せ換え(PSB1-->P15A)（井山、小林、川崎）<Br> | *ベクターの乗せ換え(PSB1-->P15A)（井山、小林、川崎）<Br> | ||
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Revision as of 02:38, 18 September 2008
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Contents |
To Do List
- 出力の決定（杉山、福冨）
- LacZ-->基質濃度に依存
- rLuciferine-->見えない？-->基質が必要、光分解性（詳しく調べる）
- Rs,PFL(LuxR,J3720-->imperial,2006)の作成（杉山、福冨）
- 入力の決定（香取）
- Arabinose promotor?-->線形成？On/Offはっきり？
- On/Offの必要性は-->なし？
- Time-delayの確認（井山、川崎、小林、冨永）
- cinIのクローニング（井山、川崎）
- 差を広げる-->温度依存性、培地依存性.PFL(Positive feedback loop)(BBa_J37015,BBa_J37020)の利用.
- AHL固定(1nM,10nM,100nM~)-->閾値（10nM付近以上）を超えると、GFPによる蛍光強度は変わらない。4~5時間で飽和する。
- 固体培地にspot
- His TagつきGFP(その他タンパク質)を発現-->freeze-->SDS-PAGE-->blotting
- Is(BW,XL10G)をT9002(BW)でdelay check
- さらに-BBa_J37020を形質転換(XL10G,BW)でtime-delayをチェック
- cinIのクローニング（井山、川崎）
- work out deal to print T-shirts (井山、福冨)
still under discussion
- 出力を交換できる形でクローニングしよう-->intermideatesの作成
- AHL synthase のkineticsについての情報は？-->ref.
- ベクターの乗せ換え(PSB1-->P15A)（井山、小林、川崎）
実験について（どこにおいたらいいか分からなかったので～不必要かも）
時間スイッチ作成
発現時間の調節をするために、以下の要件が挙げられる。
- インデューサーの合成速度を下げる。
RBSの調整(B0030-->B0033),コピー数の調整(5-->300) - レセプタータンパク質の感度を下げる。
クオラムセンシングのクロストークを利用する。生物によってAHL(Acyl-L-Homoserine Lactone)のアシル基が異なる(ref.3).生物ごとのクオラムセンシングについては、ref.9参照.
- ex)( )内はシンターゼ
- P.aeruginosa->C4-AHL(RhlI)
- V. fisheri->C6-3-oxo-AHL(LuxI)
- A.tumefaciens->C8-3-oxo-AHL(TraI)
- P.aeruginosa->C10-3-oxo-AHL(VanI)
- P.aeruginosa->C12-3-oxo-AHL(LasI)
- R.leguminosarum->C14-3-hydroxy-AHL(CinI)
Construction(From BioBrick)
- Sender(Autoinducer synthase)
- LuxI,LasI,CinI,RhlI(lacプロモーター)
- Receiver
- LuxR,LasR,CinR,RhlR
Cross-Talk Check
- LuxR vs LuxI(OK),LasI(OK),CinI(?),RhlI(OK)
- LuxI vs LuxR,LasR,CinR,RhlR
RBS交換
- 既存のパーツ
- B0034+luxI
- B0034+luxI
- New parts(planning)
- B0033(weak)+luxI
- B0032(medium)+luxI
- B0031(weaker)+luxI
連絡
実験結果より -->Rs濃度が律速→PFL(J37020)使う？Rs替える？
| 入力班 | 送受信班 | 出力班 | その他 |
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小林あおい Aoi Kobayashi 香取崇広 Takahiro Katori |
冨永将大 Masahiro Tominaga 川崎浩平 Kohei Kawasaki 井山佳美 Yoshimi Iyama |
福冨浩樹 Hiroki Fukutomi 杉山まい Mai Sugiyama |
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