Team:Chiba/Demo experiments
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###緑の部分に[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]=1:1 | ###緑の部分に[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]=1:1 | ||
###赤の部分に[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]=1:1 | ###赤の部分に[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]=1:1 | ||
- | ###無地の部分にhttp://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] | + | ###無地の部分にhttp://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]のみ |
+ | #培養&観察 | ||
=== Results === | === Results === |
Revision as of 14:01, 29 October 2008
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Contents |
Demo Experiment ~Senders~
Method
- プレ培養
- 以下のグリストを各培養液2μL中にPick。
- LB-Amp, [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002], (BW)
- LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0161 LuxI(no LVA)]), (XL10G)
- LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0178 LasI(no LVA)]), (XL10G)
- 37°Cでしんとう培養。12h
- 以下のグリストを各培養液2μL中にPick。
- 本培養
- プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
- LB-Amp, [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]
- LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0161 LuxI(no LVA)]), [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0178 LasI(no LVA)])
- 37°Cでしんとう培養。4~5h。
- プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
- Wash
- 遠心管50μL中に10μLずつ培養液を移す。
- 20°C,3600rpmで6min遠心後、上澄みを捨てる。
- 各遠心管にLB-Ampを加える。
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]が入った各遠心管に10μL
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管に5μL
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管にLB-Ampを5μL添加
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。
- [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管にLB-Ampを10μLずつ添加
- Mix
- Senderの[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]と[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]を、それぞれ1:1で[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]と混ぜる。
- 96穴シャロウプレートに100μLずつ入れていく。入れ方は図の通り。
- 緑の部分に[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]=1:1
- 赤の部分に[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]=1:1
- 無地の部分にhttp://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]のみ
- 培養&観察
Results
結果は以下の通り。
1枚目の写真は開始点。2枚目はLuxIの部分だけGFPを肉眼(蛍光灯光)で確認。3枚目はLuxIとLasI両方を確認したものです。
(それぞれ0時間、4時間、8時間後の映像。液量が100μLと少ないため、今までの実験(1000μL)での結果よりもGFP発現に時間がかかった。・・・コレ書かない方がいいのかなあ。)
--Yoshimi 13:41, 29 October 2008 (UTC)
Demo Experiment ~Receivers~
method
・receiver:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (BW)をLB-Amp 2mLで12hプレ培養し、colonyが1000位になるようにプレートに撒く。(プレート①)
・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。(プレート②)
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取
result
菌数ふり実験
0h 0.5h 1.5h
0h 0.5h 1.5h 2.0h
0h 0.5h 1.5h 2.0h 2.5h
いろんなレシーバー実験
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