Team:Chiba/Demo experiments

From 2008.igem.org

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Chiba-U.gif

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Contents

Demo Experiment ~Senders~

Method

  1. プレ培養
    1. 以下のグリストを各培養液2μL中にPickして37°Cでしんとう培養。
      1. LB-Amp, [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002], (BW)
      2. LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0161 LuxI(no LVA)]), (XL10G)
      3. LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0178 LasI(no LVA)]), (XL10G)
  2. 本培養
    1. プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
      1. LB-Amp, [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]
      2. LB-Amp+0.2%Glu, [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0161 LuxI(no LVA)]), [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]([http://partsregistry.org/Part:BBa_J04500 plac+rbs]+[http://partsregistry.org/wiki/index.php?title=Part:BBa_C0178 LasI(no LVA)])

Results

結果は以下の通り。

Team-Chiba-demo-mihon.gif *緑部分:LuxI *赤部分:LasI

 


1枚目の写真は開始点。2枚目はLuxIの部分だけGFPを肉眼(蛍光灯光)で確認。3枚目はLuxIとLasI両方を確認したものです。

(それぞれ0時間、4時間、8時間後の映像。液量が100μLと少ないため、今までの実験(1000μL)での結果よりもGFP発現に時間がかかった。・・・コレ書かない方がいいのかなあ。)

Demo Experiment ~Receivers~

method


・receiver:[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (BW)をLB-Amp 2mLで12hプレ培養し、colonyが1000位になるようにプレートに撒く。(プレート①)
・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。(プレート②)
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取

result

菌数ふり実験

菌数比1:1 Team-Chiba-IMG 0322-1.JPG Team-Chiba-IMG 0331-1.JPG Team-Chiba-IMG 0340.JPG

                   0h                      0.5h                         1.5h



菌数比1:100 Team-Chiba-IMG 0322-100.JPG Team-Chiba-IMG 0331.JPG Team-Chiba-IMG 0340-100.JPG Team-Chiba-IMG 0349-100.JPG

                  0h                        0.5h                       1.5h                     2.0h


菌数比1:1000 Team-Chiba-IMG 0322-1000.JPG Team-Chiba-IMG 0331-1000.JPG Team-Chiba-IMG 0341-1000.JPG Team-Chiba-IMG 0352-1000.JPG Team-Chiba-IMG 0378-1000.JPG

                0h                    0.5h              1.5h             2.0h                2.5h

いろんなレシーバー実験

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