Team:Chiba/Demo experiments
From 2008.igem.org
(→Method) |
(→Method) |
||
Line 25: | Line 25: | ||
##37°Cでしんとう培養。4~5h。 | ##37°Cでしんとう培養。4~5h。 | ||
#Wash | #Wash | ||
- | ##遠心管50μ | + | ##遠心管50μL中に10mLずつ培養液を移す。 |
##20°C,3600rpmで6min遠心後、上澄みを捨てる。 | ##20°C,3600rpmで6min遠心後、上澄みを捨てる。 | ||
##各遠心管にLB-Ampを加える。 | ##各遠心管にLB-Ampを加える。 | ||
- | ###[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] | + | ###[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]が入った各遠心管に10mL |
- | ###[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007] | + | ###[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管に5mL |
##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。 | ##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。 | ||
- | ##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管にLB- | + | ##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管にLB-Ampを5mL添加 |
##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。 | ##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。 | ||
- | ##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管にLB- | + | ##[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012], [http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]が入った各遠心管にLB-Ampを10mLずつ添加 |
#Mix | #Mix | ||
##Senderの[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]と[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]を、それぞれ1:1で[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]と混ぜる。 | ##Senderの[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084012 BBa_K084012]と[http://partsregistry.org/Part:BBa_K084007 BBa_K084007]を、それぞれ1:1で[http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002]と混ぜる。 |
Revision as of 14:17, 29 October 2008
Home | The Team | The Project | Parts Submitted to the Registry | Reference | Notebook | Acknowledgements |
---|
Contents |
Demo Experiment ~Senders~
Method
- プレ培養
- 以下のグリストを各培養液2mL中にPick。
- LB-Amp, BBa_T9002, (BW)
- LB-Amp+0.2%Glu, BBa_K084012(plac+rbs+LuxI(no LVA)), (XL10G)
- LB-Amp+0.2%Glu, BBa_K084007(plac+rbs+LasI(no LVA)), (XL10G)
- 37°Cでしんとう培養。12h
- 以下のグリストを各培養液2mL中にPick。
- 本培養
- プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
- LB-Amp, BBa_T9002
- LB-Amp+0.2%Glu, BBa_K084012(plac+rbs+LuxI(no LVA)), BBa_K084007(plac+rbs+LasI(no LVA))
- 37°Cでしんとう培養。4~5h。
- プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
- Wash
- 遠心管50μL中に10mLずつ培養液を移す。
- 20°C,3600rpmで6min遠心後、上澄みを捨てる。
- 各遠心管にLB-Ampを加える。
- BBa_T9002が入った各遠心管に10mL
- BBa_K084012, BBa_K084007が入った各遠心管に5mL
- BBa_K084012, BBa_K084007が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。
- BBa_K084012, BBa_K084007が入った各遠心管にLB-Ampを5mL添加
- BBa_K084012, BBa_K084007が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。
- BBa_K084012, BBa_K084007が入った各遠心管にLB-Ampを10mLずつ添加
- Mix
- SenderのBBa_K084012とBBa_K084007を、それぞれ1:1でBBa_T9002と混ぜる。
- 96穴シャロウプレートに100μLずつ入れていく。入れ方は図の通り。
- 緑の部分にBBa_K084012:BBa_T9002=1:1
- 赤の部分にBBa_K084007:BBa_T9002=1:1
- 無地の部分にBBa_T9002のみ
- 培養&観察
Results
結果は以下の通り。
1枚目の写真は開始点。2枚目はLuxIの部分だけGFPを肉眼(蛍光灯光)で確認。3枚目はLuxIとLasI両方を確認したものです。
(それぞれ0時間、4時間、8時間後の映像。液量が100μLと少ないため、今までの実験(1000μL)での結果よりもGFP発現に時間がかかった。・・・コレ書かない方がいいのかなあ。)
--Yoshimi 13:41, 29 October 2008 (UTC)
Demo Experiment ~Receivers~
method
・Receiver(T9002)のプレ培養
receiver:BBa_T9002 (BW)をLB-Amp 2ml培養(37℃,12h)
・Sender(S03623)のプレ培養
sender:BBa_S03623 (BW)をLB-Amp 10ml培養(37℃,12h)
・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。(プレート②)
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取
・Receiver(T9002)のプレ培養receiver:BBa_T9002 (BW)をLB-Amp 2mLで12hプレ培養し、colonyが1000位になるようにプレートに撒く。(プレート①)
・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。(プレート②)
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取
result
菌数ふり実験
0h 0.5h 1.5h
0h 0.5h 1.5h 2.0h
0h 0.5h 1.5h 2.0h 2.5h
いろんなレシーバー実験
Home | The Team | The Project | Parts Submitted to the Registry | Notebook |
---|