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Revision as of 14:28, 29 October 2008

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Demo Experiment ~Senders~

Method

プレ培養
1. 以下のグリストを各培養液2mL中にPick。
  1. LB-Amp, BBa_T9002, (BW)
  2. LB-Amp+0.2%Glu, BBa_K084012(plac+rbs+LuxI(no LVA)), (XL10G)
  3. LB-Amp+0.2%Glu, BBa_K084007(plac+rbs+LasI(no LVA)), (XL10G)
2. 37°Cでしんとう培養。12h
本培養
1. プレ培養液を6.25%ずつ各培養液に添加する。
  1. LB-Amp, BBa_T9002
  2. LB-Amp+0.2%Glu, BBa_K084012(plac+rbs+LuxI(no LVA)), BBa_K084007(plac+rbs+LasI(no LVA))
2. 37°Cでしんとう培養。4～5h。
Wash
1. 遠心管50mL中に10mLずつ培養液を移す。
2. 20°C,3600rpmで6min遠心後、上澄みを捨てる。
3. 各遠心管にLB-Ampを加える。
  1. BBa_T9002が入った各遠心管に10mL
  2. BBa_K084012, BBa_K084007が入った各遠心管に5mL
4. BBa_K084012, BBa_K084007が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。
5. BBa_K084012, BBa_K084007が入った各遠心管にLB-Ampを5mL添加
6. BBa_K084012, BBa_K084007が入った遠心管を20°C,3600rpmで6min遠心。上澄みを捨てる。
7. BBa_K084012, BBa_K084007が入った各遠心管にLB-Ampを10mLずつ添加
Mix
1. SenderのBBa_K084012とBBa_K084007を、それぞれ1：1でBBa_T9002と混ぜる。
2. 96穴シャロウプレートに100μLずつ入れていく。入れ方は図の通り。
  1. 緑の部分にBBa_K084012:BBa_T9002=1:1
  2. 赤の部分にBBa_K084007:BBa_T9002=1:1
  3. 無地の部分にBBa_T9002のみ
培養＆観察

Results

結果は以下の通り。

*緑部分：LuxI　*赤部分：LasI

開始点

LuxIでGFP確認

LasIでもGFP確認

1枚目の写真は開始点。2枚目はLuxIの部分だけGFPを肉眼（蛍光灯光）で確認。３枚目はLuxIとLasI両方を確認したものです。

（それぞれ０時間、4時間、8時間後の映像。液量が100μLと少ないため、今までの実験（1000μL）での結果よりもGFP発現に時間がかかった。・・・コレ書かない方がいいのかなあ。）

--Yoshimi 13:41, 29 October 2008 (UTC)

Demo Experiment ~Receivers~

method

・Receiver(T9002)のプレ培養　　receiver:BBa_T9002 (BW)をLB-Amp 2ml培養(37℃,12h) ・Sender(S03623)のプレ培養　　sender:BBa_S03623 (BW)をLB-Amp 10ml培養(37℃,12h) ・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。（プレート②）
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取

・Receiver(T9002)のプレ培養receiver:BBa_T9002 (BW)をLB-Amp 2mLで12hプレ培養し、colonyが1000位になるようにプレートに撒く。（プレート①）
・LBで12hプレ培養したsenderの菌液とLB-agar(50℃)を混ぜて(LB:LBagar=1:1)シャーレに流し込んで固まらせる。（プレート②）
・プレート②ができる頃にプレート①のreceiverのcolonyがちょうど良い大きさ(プレートに撒いて12hくらい)になるようにする。
・receiverのcolonyをニトロセルロースで写し取り、senderが入ったプレートの表面にはる。はったときからスタート。
・37℃で培養。
・決まった時間になったらUVを当ててGFPが見えるかチェックする。
香取

result

菌数ふり実験

菌数比1:1

                   0h                      0.5h                         1.5h

菌数比1:100

                  0h                        0.5h                       1.5h                     2.0h

菌数比1:1000

                0h                    0.5h              1.5h             2.0h                2.5h

いろんなレシーバー実験

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