Team:Chiba/protocol/PCR/j
From 2008.igem.org
PCR
- DNA特定部位上にある塩基配列を調べ、2種のプライマー(Foward・Reverese)を作成。
- 増幅したいDNAまたはそれが含まれているDNA断片、Thermopol Buffer、dNTP Mix、プライマー(2種)、DNAポリメラーゼ(酵素)、水をPCR用チューブに入れる。この時は量の少ない順に添加していくが、DNAポリメラーゼは失活する恐れがあるため一番最後に入れる。
- PCRロボサイクルの設定をして操作完了です。以下は設定例。
Start: 94 °C for 5 min. (melt) cycle: melt: 1 min. anneal : 30 sec. cycle end: extension:72 °C for 3.5 min. 25 cycles 72 °C for 10 min store: keep at 6 °C forever