Team:Chiba/protocol/PCR/j

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PCR

  1. DNA特定部位上にある塩基配列を調べ、2種のプライマー(Foward・Reverese)を作成。
  2. 増幅したいDNAまたはそれが含まれているDNA断片、Thermopol Buffer、dNTP Mix、プライマー(2種)、DNAポリメラーゼ(酵素)、水をPCR用チューブに入れる。この時は量の少ない順に添加していくが、DNAポリメラーゼは失活する恐れがあるため一番最後に入れる。
  3. PCRロボサイクルの設定をして操作完了です。以下は設定例。
Start: 94 °C for 5 min. (melt)
cycle:          melt:            1 min. 
             anneal :           30 sec. 
cycle end: extension:72 °C for 3.5 min. 
25 cycles 
72 °C for 10 min
store: keep at 6 °C forever