Team:Chiba/protocol/transformation/j

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Zコンピで形質転換

  1. 氷上でZ-competentcellsを融解
  2. 1チューブにZ-competentcellsを30~50μLとplasmidを1μL加えタッピング。このときDNA溶液は全体の5%を超えないようにする。(plasmid溶液(100ng/μL)は1μL、ライゲーション産物は4μLぐらいが目安)
  3. 氷上で10分間置く。
  4. SocをZ-competentcellsに対して4倍程度加える。特定の抗生物質への耐性遺伝子(マーカー)を持つ耐性菌でも、最初は分解酵素を持っていないため何もない培地で成長させる。
  5. 37℃で30~60分間低温しんとう。
  6. 各マーカーに対応したプレートへ植菌(plating)。platingする量はZ-competentcellsのcfuや、混合したplasimid量/状態によって変える。
  7. plateにテープなどをまきつけて、37℃で一晩培養する。