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Team:Chiba/protocol/phenotype/T9002/j
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=== 装置 & 試薬 === | === 装置 & 試薬 === | ||
*装置 | *装置 | ||
| - | **しんとう培養器(37℃ | + | **しんとう培養器 |
| - | ** | + | ***Innova 4200 Benchtop or Floor-Stackable Incubator Shaker(37℃) |
| + | ***タイテック BioShaker BR-33FM(30℃,200rpm) | ||
| + | **48 well plate(deep well) | ||
**Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6) | **Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6) | ||
| - | **Allegra tm X- | + | **Beckman Allegra<sup>tm</sup> X-12R Centrifuga(Beckman Coulter) |
*試薬 | *試薬 | ||
**AHL(100uM,5uM,100nM) | **AHL(100uM,5uM,100nM) | ||
| - | **E.coli | + | **E.coli JW1908 Culture Containing T9002 |
=== プロトコル === | === プロトコル === | ||
Latest revision as of 09:37, 15 December 2008
Contents |
Part BBa_T9002:
目的
T9002を導入した大腸菌は、AHL存在下でGFPを発現する。種種の濃度のAHLを添加し、添加後の蛍光強度変化の時間依存性を調べる。
装置 & 試薬
- 装置
- しんとう培養器
- Innova 4200 Benchtop or Floor-Stackable Incubator Shaker(37℃)
- タイテック BioShaker BR-33FM(30℃,200rpm)
- 48 well plate(deep well)
- Fluoroskan Ascent 2.5(program:Ascent Software Version 2.6)
- Beckman Allegratm X-12R Centrifuga(Beckman Coulter)
- しんとう培養器
- 試薬
- AHL(100uM,5uM,100nM)
- E.coli JW1908 Culture Containing T9002
プロトコル
プレ培（O/N,測定日の前日）
- T9002をグリセロールストックからpickして、LB-Amp液体培地で培養する。
- 37℃しんとう培養器で一晩培養する
翌日
- 培養液100μLを、40mlのLB-Amp液体培地に加え、37℃で6-8時間しんとう培養する。
- Wash-->培養液を50mlファルコンチューブに、10mlずつ分注。
- -->3500rpmで6分間遠心。上澄みを捨てる。
- -->新しいLB-Amp培地を10mlずつ加え（1倍希釈）、pipettingにより再懸濁。
- 48 deep well plateに、1mlずつ分注。
- AHLを以下の表に示すのように添加する。
- 96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
- 37℃でしんとう培養
- 2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
- 測定条件
- 測定条件
- 測定前-->shake:On time = 1min,Off time = 10 sec,
- 測定-->integration time = 1000ms
- Beam width:Normal Beam
- Wavelength pair = 485nm(excitation) and 527nm(emission)
issues? discussion
- 蛍光強度がいくつ以上なら目視で確認できるのか
