Team:Chiba/protocol/transformation/j

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==Zコンピで形質転換==
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#氷上でZ-competentcellsを融解
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#１チューブにZ-competentcellsを30~50μLとplasmidを1μL加えタッピング。このときDNA溶液は全体の５％を超えないようにする。（plasmid溶液（100ng/μL）は1μL、ライゲーション産物は4μLぐらいが目安）
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#氷上で10分間置く。
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#SocをZ-competentcellsに対して４倍程度加える。特定の抗生物質への耐性遺伝子（マーカー）を持つ耐性菌でも、最初は分解酵素を持っていないため何もない培地で成長させる。
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#37℃で30～60分間低温しんとう。
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#各マーカーに対応したプレートへ植菌（plating）。platingする量はZ-competentcellsのcfuや、混合したplasimid量/状態によって変える。
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#plateにテープなどをまきつけて、37℃で一晩培養する。

Latest revision as of 11:25, 15 December 2008

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Zコンピで形質転換

  1. 氷上でZ-competentcellsを融解
  2. １チューブにZ-competentcellsを30~50μLとplasmidを1μL加えタッピング。このときDNA溶液は全体の５％を超えないようにする。（plasmid溶液（100ng/μL）は1μL、ライゲーション産物は4μLぐらいが目安）
  3. 氷上で10分間置く。
  4. SocをZ-competentcellsに対して４倍程度加える。特定の抗生物質への耐性遺伝子（マーカー）を持つ耐性菌でも、最初は分解酵素を持っていないため何もない培地で成長させる。
  5. 37℃で30～60分間低温しんとう。
  6. 各マーカーに対応したプレートへ植菌（plating）。platingする量はZ-competentcellsのcfuや、混合したplasimid量/状態によって変える。
  7. plateにテープなどをまきつけて、37℃で一晩培養する。
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