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Team:Chiba/protocol/phenotype/T9002/j
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プレ培（O/N,測定日の前日） | プレ培（O/N,測定日の前日） | ||
| - | * | + | *T9002をグリセロールストックからpickして、LB-Amp液体培地で培養する。 |
| + | *37℃しんとう培養器で一晩培養する | ||
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| + | 翌日 | ||
| + | *培養液100μLを、40mlのLB-Amp液体培地に加え、37℃で6-8時間しんとう培養する。 | ||
| + | *Wash-->培養液を50mlファルコンチューブに、10mlずつ分注。 | ||
| + | :-->3500rpmで6分間遠心。上澄みを捨てる。 | ||
| + | :-->新しいLB-Amp培地を10mlずつ加え（1倍希釈）、pipettingにより再懸濁。 | ||
| + | *48 deep well plateに、1mlずつ分注。 | ||
| + | *AHLを以下の表に示すのように添加する。 | ||
| + | *96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。 | ||
| + | *37℃でしんとう培養 | ||
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| + | *2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。 | ||
Revision as of 17:56, 20 September 2008
Contents |
Part BBa_T9002:
目的
T9002を導入した大腸菌は、AHL存在下でGFPを発現する。種種の濃度のAHLを添加し、添加後の蛍光強度変化の時間依存性を調べる。
装置 & 試薬
- 装置
- しんとう培養器(37℃,30℃)
- 46 well plate(deep well)
- 試薬
- AHL(100uM,5uM,100nM)
- E.coli BW⊿FliC Culture Containing T9002
プロトコル
プレ培（O/N,測定日の前日）
- T9002をグリセロールストックからpickして、LB-Amp液体培地で培養する。
- 37℃しんとう培養器で一晩培養する
翌日
- 培養液100μLを、40mlのLB-Amp液体培地に加え、37℃で6-8時間しんとう培養する。
- Wash-->培養液を50mlファルコンチューブに、10mlずつ分注。
- -->3500rpmで6分間遠心。上澄みを捨てる。
- -->新しいLB-Amp培地を10mlずつ加え（1倍希釈）、pipettingにより再懸濁。
- 48 deep well plateに、1mlずつ分注。
- AHLを以下の表に示すのように添加する。
- 96 shallow well plateに100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
- 37℃でしんとう培養
- 2h後、3h後…に、100μLずつ分注し、蛍光強度を測定する。
