Team:Chiba/Calendar-Home/21 August 2008

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(Difference between revisions)

Revision as of 09:13, 24 October 2008

>Home | Notebook

20 August 2008 <|> 22 August 2008

Laboratory work

Team:Input

(-->20/8)pick transformants

[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J06650 BBa_J06650](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22136 BBa_J22136](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_J22141 BBa_J22141](2007)

を２ml培養、12h。ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、さらに1h培養した。

UV照射実験(プレート編)(~24日)
two plasmids from ---
- (Repressor)-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-
- (Reporter)-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)

Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80℃ freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。

37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを10⁵希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
UVを照射して9h後、21h後にそれぞれ両方のプレートに次の同じ操作をする。
両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
37℃,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに10⁵希釈して20μl撒いた。

Colony count

	AHLなし	AHL100nM
9h	606	453
12h	146	151

AHLが入っていないほうのコロニーはいづれも光っていた。→機能チェックはOK

Team:Communication

(20/8)--->PCR

[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076 BBa_C0076](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2006)

DNA Template	1
dNTP mix	10
Foward Primer	5
Reverse Primer	5
DNA polymerase TAQ	1
Thermopol Buffer	5
dH₂O	28
TOTAL	50μL

95℃,5min -> ( 95℃,1min -> 52℃,1min -> 72℃,1min )･･･25cycles -> 72℃,10min -> 6℃

--->Gel Check

Sample DNA	3
Loading Dye	2
dH₂O	7
TOTAL	12μL

From left;

[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2007) -> None
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2006) -> None
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076 BBa_C0076](2007) -> None
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2007) -> OK
[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2006) -> OK

Transformation

competent cells : XL10G

[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154 BBa_S03154](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154 BBa_S03154](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026 BBa_I9026](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026 BBa_I9026](2006)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030 BBa_I9030](2007)
[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030 BBa_I9030](2006)

--->(23/8)Digestion

Team:Output

Transformation

[http://partsregistry.org/Part:BBa_J32007 BBa_J32007](Lux CDABE)-->no colony
[http://partsregistry.org/Part:BBa_B0034 BBa_B0034](RBS)-->colony

結果:成功→RBS

失敗→Lux CDABE(二回行ったがどちらもコロニーができなかった)→三回目に成功

@@ Line 50: / Line 50: @@
 ===Team:Communication===
 :(20/8)--->'''[[Team:Chiba/protocol/PCR|PCR]]'''
-::*BBa_C0070(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2007)
-::*BBa_C0070(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2006)
-::*BBa_C0076(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076 BBa_C0076](2007)
-::*BBa_C0078(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2007)
-::*BBa_C0078(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2006)
@@ Line 83: / Line 83: @@
 </tr>
 <tr>
-<td>dH2O</td>
+<td>dH<sub>2</sub>O</td>
 <td>28</td>
 </tr>
@@ Line 111: / Line 111: @@
 </tr>
 <tr>
-<td>dH2O</td>
+<td>dH<sub>2</sub>O</td>
 <td>7</td>
 </tr>
@@ Line 121: / Line 121: @@
 :From left;
-::*BBa_C0078(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078] -> None
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2007) -> None
-::*BBa_C0078(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078] -> None
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0078 BBa_C0078](2006) -> None
-::*BBa_C0076(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076] -> None
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0076 BBa_C0076](2007) -> None
-::*BBa_C0070(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070] -> OK
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2007) -> OK
-::*BBa_C0070(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070] -> OK
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_C0070 BBa_C0070](2006) -> OK
 |}
@@ Line 132: / Line 132: @@
 :'''[[Team:Chiba/protocol/transformation|Transformation]]'''
 :competent cells : XL10G
-::*BBa_S03154(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154 BBa_S03154](2007)
-::*BBa_S03154(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03154 BBa_S03154](2006)
-::*BBa_I9026(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026 BBa_I9026](2007)
-::*BBa_I9026(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9026 BBa_I9026](2006)
-::*BBa_I9030(2007) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030 BBa_I9030](2007)
-::*BBa_I9030(2006) [http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030]
+::*[http://partsregistry.org/Part:BBa_I9030 BBa_I9030](2006)
@@ Line 143: / Line 143: @@
 --->(23/8)'''[[Team:Chiba/protocol/digestion|Digestion]]'''
 ===Team:Output===