- Transformation of E. coli TOP10 strain with ligations (pACYC177+OmpA_alpha + deltaA and pACYC177+OmpA_omega + deltaA).
- Transformants plating on LB + kanamycin.
Sprawdzenie czy degradacja fuzji z Ompa jest wynikiem działania proteaz lon iompt (obecne w top10)
PIOTR
Zwirowanie, zawieszenie, dodanie buforu lizującego (skład), zagotowanie, nałożenie na żel poliakryl, transfer na nitrocelulozę, blokowanie, przeciwciała anty-A, płukanie, przeciwciała anty-królik, wywołanie BCIP i NBT (omp_omega_A_alfa, z i bez indukcji, omp_A_alfa)
(Zdjęcie żelu)
Brak rużnic ekspresji i degradacji w top10 i rosettach => degradacja nie wynika z działania proteaz- z czego?
|
 |
"
