Team:Chiba/Calendar-Home/21 August 2008

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(Difference between revisions)

Revision as of 09:09, 24 October 2008

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20 August 2008 <|> 22 August 2008

Laboratory work

Team:Input

(-->20/8)pick transformants

BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J06650(2006)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)

を２ml培養、12h。ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、さらに1h培養した。

UV照射実験(プレート編)(~24日)
two plasmids from ---
- (Repressor)-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-
- (Reporter)-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)

Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80℃ freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。

37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを10⁵希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
UVを照射して9h後、21h後にそれぞれ両方のプレートに次の同じ操作をする。
両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
37℃,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに10⁵希釈して20μl撒いた。

Colony count

	AHLなし	AHL100nM
9h	606	453
12h	146	151

AHLが入っていないほうのコロニーはいづれも光っていた。→機能チェックはOK

Team:Communication

(20/8)--->PCR

BBa_C0070(2007) [1]
BBa_C0070(2006) [2]
BBa_C0076(2007) [3]
BBa_C0078(2007) [4]
BBa_C0078(2006) [5]

DNA Template	1
dNTP mix	10
Foward Primer	5
Reverse Primer	5
DNA polymerase TAQ	1
Thermopol Buffer	5
dH2O	28
TOTAL	50μL

95℃,5min -> ( 95℃,1min -> 52℃,1min -> 72℃,1min )･･･25cycles -> 72℃,10min -> 6℃

--->Gel Check

Sample DNA	3
Loading Dye	2
dH2O	7
TOTAL	12μL

From left;

BBa_C0078(2007) [6] -> None
BBa_C0078(2006) [7] -> None
BBa_C0076(2007) [8] -> None
BBa_C0070(2007) [9] -> OK
BBa_C0070(2006) [10] -> OK

Transformation

competent cells : XL10G

BBa_S03154(2007) [11]
BBa_S03154(2006) [12]
BBa_I9026(2007) [13]
BBa_I9026(2006) [14]
BBa_I9030(2007) [15]
BBa_I9030(2006) [16]

--->(23/8)Digestion

Team:Output

Transformation

BBa_J32007(Lux CDABE)-->no colony
BBa_B0034(RBS)-->colony

結果:成功→RBS

失敗→Lux CDABE(二回行ったがどちらもコロニーができなかった)→三回目に成功

@@ Line 5: / Line 5: @@
 ==Laboratory work==
 ===Team:Input===
-.20にtransformationしたもの
+(-->20/8)pick transformants
 *[http://partsregistry.org/Part:BBa_R0051 BBa_R0051](2007)
@@ Line 18: / Line 18: @@
-<br>UV照射実験(プレート編)(~24日)
+*UV照射実験(プレート編)(~24日)
-<br>-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-,-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)の2plasmidを使用。
+*two plasmids from ---
-<br>グリストをつついて、試験管で2ml培養。(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。
+**(Repressor)-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-
+**(Reporter)-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)
+#Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80℃ freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。
 <br>37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを10<sup>5</sup>希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
 <br>37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
@@ Line 28: / Line 31: @@
-コロニー数
+*Colony count
 <table width="200" border="4" cellpadding="0" cellspacing="0" bordercolor="#000000">
 <td width="257"></td>
@@ Line 44: / Line 47: @@
 AHLが入っていないほうのコロニーはいづれも光っていた。→機能チェックはOK
 ===Team:Communication===