Team:Chiba/Calendar-Home/21 August 2008

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20 August 2008 <|> 22 August 2008

Laboratory work

Team:Input

(-->20/8)

Inoculated transformants for 12 hours in LB 2mL containing Ampicillin.

BBa_R0051(2007)
BBa_R0051(2006)
BBa_J06650(2007)
BBa_J06650(2006)
BBa_J22136(2007)
BBa_J22141(2007)

ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、さらに1h培養した。

UV照射実験(プレート編)(~24日)
two plasmids from ---
- (Repressor)-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-
- (Reporter)-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)

Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80°C freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。

37°Cで12h培養後、濁ったらそれぞれを10⁵希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
37°Cで12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
UVを照射して9h後、21h後にそれぞれ両方のプレートに次の同じ操作をする。
両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
37°C,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに10⁵希釈して20μl撒いた。

Colony count

	AHLなし	AHL100nM
9h	606	453
12h	146	151

AHLが入っていないほうのコロニーはいづれも光っていた。→機能チェックはOK

Team:Communication

(20/8)--->PCR

BBa_C0070(2007)
BBa_C0070(2006)
BBa_C0076(2007)
BBa_C0078(2007)
BBa_C0078(2006)

DNA Template	1
dNTP mix	10
Foward Primer	5
Reverse Primer	5
DNA polymerase TAQ	1
Thermopol Buffer	5
dH₂O	28
TOTAL	50μL

95℃,5min -> ( 95℃,1min -> 52℃,1min -> 72℃,1min )･･･25cycles -> 72℃,10min -> 6℃

--->Gel Check

Sample DNA	3
Loading Dye	2
dH₂O	7
TOTAL	12μL

From left;

BBa_C0078(2007) -> None
BBa_C0078(2006) -> None
BBa_C0076(2007) -> None
BBa_C0070(2007) -> OK
BBa_C0070(2006) -> OK

Transformation

competent cells : XL10G

BBa_S03154(2007)
BBa_S03154(2006)
BBa_I9026(2007)
BBa_I9026(2006)
BBa_I9030(2007)
BBa_I9030(2006)

--->(23/8)Digestion

Team:Output

Transformation

BBa_J32007(2007)-->no colony-->no colony(2 times)-->colony(3times)
BBa_B0034(2007)-->colony

@@ Line 25: / Line 25: @@
 **(Reporter)-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)
-#Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80℃ freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。
+#Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80°C freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。
-<br>37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを10<sup>5</sup>希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
+<br>37°Cで12h培養後、濁ったらそれぞれを10<sup>5</sup>希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
-<br>37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
+<br>37°Cで12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
 <br>UVを照射して9h後、21h後にそれぞれ両方のプレートに次の同じ操作をする。
 <br>両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
-<br>37℃,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに10<sup>5</sup>希釈して20μl撒いた。
+<br>37°C,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに10<sup>5</sup>希釈して20μl撒いた。