Team:Chiba/Calendar-Home/21 August 2008

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20 August 2008 <|> 22 August 2008

Contents

Laboratory work

Team:Input

(-->20/8)pick transformants

を２ml培養、12h。ただしコロニーが１個だけだったBBa_J22141は2ml培養の11h後にIPTGを20μl加え、 さらに1h培養した。


  • UV照射実験(プレート編)(~24日)
  • two plasmids from ---
    • (Repressor)-Ptrc-LuxR-Plux-cI-colE1-Amp-
    • (Reporter)-PcI-GFP-p15a-Cm-(BW)
  1. Inoculated (Reporter) culture from glycerol stock(-80℃ freezer) in 2mL LB medium.(LB-Amp,Cm)(LB-Amp,Cm,AHL100nM)の2種類。


37℃で12h培養後、濁ったらそれぞれを105希釈してAHLが入っていないものはLB-Amp,Cm,AHLが入っているものはAHL-Amp,Cm,AHL100nMのプレートにそれぞれ20μl撒く。
37℃で12h培養後、きちんとコロニーができていることを確認し、両方のプレートにUVを照射する。UVの波長は254nm,UVランプとプレートの距離は14cm。
UVを照射して9h後、21h後にそれぞれ両方のプレートに次の同じ操作をする。
両方のプレートのコロニーをつついてそれぞれ(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)2ml培養する。
37℃,で12h培養後、濁っていたので、それぞれを(LB-Amp,Cm),(LB-Amp,Cm,AHL100nM)のプレートに105希釈して20μl撒いた。


  • Colony count
AHLなしAHL100nM
9h 606453
12h 146151


AHLが入っていないほうのコロニーはいづれも光っていた。→機能チェックはOK

Team:Communication

(20/8)--->PCR
  • BBa_C0070(2007) [1]
  • BBa_C0070(2006) [2]
  • BBa_C0076(2007) [3]
  • BBa_C0078(2007) [4]
  • BBa_C0078(2006) [5]


DNA Template 1
dNTP mix 10
Foward Primer 5
Reverse Primer 5
DNA polymerase TAQ 1
Thermopol Buffer 5
dH2O 28
TOTAL 50μL


95℃,5min -> ( 95℃,1min -> 52℃,1min -> 72℃,1min )･･･25cycles -> 72℃,10min -> 6℃


--->Gel Check
Chiba-0821.JPG
Sample DNA 3
Loading Dye 2
dH2O 7
TOTAL 12μL
From left;
  • BBa_C0078(2007) [6] -> None
  • BBa_C0078(2006) [7] -> None
  • BBa_C0076(2007) [8] -> None
  • BBa_C0070(2007) [9] -> OK
  • BBa_C0070(2006) [10] -> OK


Transformation
competent cells : XL10G
  • BBa_S03154(2007) [11]
  • BBa_S03154(2006) [12]
  • BBa_I9026(2007) [13]
  • BBa_I9026(2006) [14]
  • BBa_I9030(2007) [15]
  • BBa_I9030(2006) [16]



--->(23/8)Digestion


Team:Output

Transformation

結果:成功→RBS
失敗→Lux CDABE(二回行ったがどちらもコロニーができなかった)→三回目に成功
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