PCR

PCR1

• pFlhDC (O111-F / O113-R)
• Gene FlhDC (O134-F / O131-R)
• pFlgB (O102-F / O103-R)
• pFlhB (O108-F / O109-R)

Program: Gradient
Denaturation :
98°C-5'
Cycling 1 (3X) :
98°C-10"
Gradient 61°C +/-10°C - 30
72°C-30"
Cycling 2 (25X) :
98°C-10"
72°C-30"
Elongation :
72°C-5'

Vf=20µL
H20=13,4µL
Buffer5X=4µL
dNTP=0,4µL
O1=1µL
O2=1µL
Phusion=0,2µL

PCR3

• PCRFliA1 (O143-F / O152-R)
• PCRFliA2 (O153-F / O150-R)
• PCRFliA3 (O148-F / O150-R)

Program: PCRFliA1
Denaturation :
98°C-5'
Cycling 1 (30X) :
98°C-10"
Gradient 66°C +/-6°C - 25
72°C-20"
Elongation :
72°C-5'

Program: PCRFliA2
Denaturation :
98°C-5'
Cycling 1 (3X) :
98°C-10"
Gradient 61°C +/-10°C - 25
72°C-20"
Cycling 2 (30X) :
98°C-10"
72°C-30"
Elongation :
72°C-5'

Program: PCRFliA3
Denaturation :
98°C-30'
Cycling 1 (2X) :
98°C-10"
72°C-30"
Cycling 2 (5X) :
98°C-10"
98°C->72°C low decreasing 1.0°C/s
72°C-30"
Elongation :
72°C-5'

Cloning of EnvZ*

Concentration measurement by Biophotometer

Ligation