Team:Chiba/jk

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:-ベクターの乗せ換え(PSB1-->P15A)（井山、小林、川崎）<Br>
:-ベクターの乗せ換え(PSB1-->P15A)（井山、小林、川崎）<Br>
:-cinIのクローニング（井山、川崎）<Br>
:-cinIのクローニング（井山、川崎）<Br>
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:-BBa_J37015を形質転換(XL10G)-->精製-->ゲルチェック-->形質転換(BW⊿FliC)(冨永)<Br>
 
*work out deal to print T-shirts (井山、福冨)
*work out deal to print T-shirts (井山、福冨)
===still under discussion===
===still under discussion===
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#AHL固定(1nM,10nM,100nM~)
#AHL固定(1nM,10nM,100nM~)
#固体培地にspot
#固体培地にspot
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#-BBa_J37015を形質転換(XL10G)-->精製-->ゲルチェック-->形質転換(BW⊿FliC)<Br>
#His TagつきGFP(その他タンパク質)を発現-->freeze-->SDS-PAGE-->blotting
#His TagつきGFP(その他タンパク質)を発現-->freeze-->SDS-PAGE-->blotting
*出力を交換できる形でクローニングしよう
*出力を交換できる形でクローニングしよう
*AHL synthase のkineticsについての情報は？
*AHL synthase のkineticsについての情報は？
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=='''実験について（どこにおいたらいいか分からなかったので～不必要かも）'''==
=='''実験について（どこにおいたらいいか分からなかったので～不必要かも）'''==

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Contents

To Do List

  • 出力の決定（杉山、福冨）
  • 入力の決定（香取）
  • Time-delayの確認（井山、川崎、小林、冨永）
-ベクターの乗せ換え(PSB1-->P15A)（井山、小林、川崎）
-cinIのクローニング（井山、川崎）
  • work out deal to print T-shirts (井山、福冨)

still under discussion

  1. 差を広げる-->温度、培地、替えてみる．PFL(Positive feedback loop)(BBa_37015)の利用.
  2. AHL固定(1nM,10nM,100nM~)
  3. 固体培地にspot
  4. -BBa_J37015を形質転換(XL10G)-->精製-->ゲルチェック-->形質転換(BW⊿FliC)
  5. His TagつきGFP(その他タンパク質)を発現-->freeze-->SDS-PAGE-->blotting
  • 出力を交換できる形でクローニングしよう
  • AHL synthase のkineticsについての情報は？

実験について（どこにおいたらいいか分からなかったので～不必要かも）

時間スイッチ作成

発現時間の調節をするために、以下の要件が挙げられる。

  1. インデューサーの合成速度を下げる。
    RBSの調整(B0030-->B0033),コピー数の調整(5-->300)
  2. レセプタータンパク質の感度を下げる。
    クオラムセンシングのクロストークを利用する。生物によってAHL(Acyl-L-Homoserine Lactone)のアシル基が異なる(ref.3).生物ごとのクオラムセンシングについては、ref.9参照.
  • ex)( )内はシンターゼ
    • P.aeruginosa->C4-AHL(RhlI)
    • V. fisheri->C6-3-oxo-AHL(LuxI)
    • A.tumefaciens->C8-3-oxo-AHL(TraI)
    • P.aeruginosa->C10-3-oxo-AHL(VanI)
    • P.aeruginosa->C12-3-oxo-AHL(LasI)
    • R.leguminosarum->C14-3-hydroxy-AHL(CinI)

Construction(From BioBrick)

  • Sender(Autoinducer synthase)
LuxI,LasI,CinI,RhlI(lacプロモーター)
  • Receiver
LuxR,LasR,CinR,RhlR

Cross-Talk Check

  1. LuxR vs LuxI(OK),LasI(OK),CinI(?),RhlI(OK)
  2. LuxI vs LuxR,LasR,CinR,RhlR

RBS交換

  • 既存のパーツ
    • B0034+luxI
  • New parts(planning)
    • B0033(weak)+luxI
    • B0032(medium)+luxI
    • B0031(weaker)+luxI


入力班 送受信班 出力班 その他

小林あおい Aoi Kobayashi

香取崇広 Takahiro Katori

冨永将大 Masahiro Tominaga

川崎浩平 Kohei Kawasaki

井山佳美 Yoshimi Iyama

福冨浩樹 Hiroki Fukutomi

杉山まい Mai Sugiyama

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