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Team:Chiba/protocol/j
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Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。 | Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。 | ||
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| + | *SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは？ | ||
| + | :Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。 | ||
| + | :これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。 | ||
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| + | === DNAリン酸化 === | ||
| + | アイジェムチバ2008では未使用。 | ||
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| + | ダイジェスチョンなどで作成した複数のDNA断片を組み替えてつなげる操作です。 | ||
== フェノタイプチェック == | == フェノタイプチェック == | ||
Latest revision as of 05:02, 27 June 2009
Contents |
形質転換
- 形質転換（通称：トラフォ）とは？
- 外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。
- アイジェムチバ2008では、XL10GOLD，BW35113，などの大腸菌株を使用しています。
Z コンピ
Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。
エレクトロポレーション
アイジェムチバ2008では使用履歴なし。
DNA精製
- DNA精製（通称：ミニプレ）とは？
- スモールスケールで生物からプラスミドを精製することです。
シグマプレップ
Sigma Miniprep kit によるDNA精製プロトコル
キアプレップ
QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル
ザイモDNAクリーン
ライゲーション過程などで必要不可欠なザイモクリーンのプロトコルです。
アガロースゲル電気泳動
- アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？
- DNAを分離する手法のことです。
- さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使います。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作です。
- 経験を積むほど素敵なゲルを作成することができます。職人の知恵と力量が試されます。簡単に言うときれいなゲルほど良いバンドがでるんです。
アガロースゲル電気泳動
アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。
ポリメラーゼ連鎖反応
- ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）とは？
- DNAを増幅させる手法のことです。
- これを使えばたったの2時間で目的の部分のDNAを増幅させることができます。
PCR
卓上型PCR装置を使ったPCR法のプロトコルです。
ダイジェスチョン
ダイジェスチョン
DNAを制限酵素によって切断します。ライゲーションやDNAの長さを確認するために必要不可欠な操作です。
ライゲーション
ゲル抽出
アガロースゲル電気泳動後にそのゲルからDNAを抽出する操作です。
DNA脱リン酸化
- SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは？
- Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。
- これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。
DNAリン酸化
アイジェムチバ2008では未使用。
ライゲーション
ダイジェスチョンなどで作成した複数のDNA断片を組み替えてつなげる操作です。
フェノタイプチェック
T9002 protocol
time-delay protocol
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