"
Team:Chiba/protocol/j
From 2008.igem.org
(Difference between revisions)
(→アガロースゲル電気泳動) |
(→形質転換) |
||
| (15 intermediate revisions not shown) | |||
| Line 6: | Line 6: | ||
*形質転換（通称：トラフォ）とは？ | *形質転換（通称：トラフォ）とは？ | ||
:外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。 | :外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。 | ||
| - | : | + | :アイジェムチバ2008では、XL10GOLD，BW35113，などの大腸菌株を使用しています。 |
===[[Team:Chiba/protocol/transformation/j|Z コンピ]] === | ===[[Team:Chiba/protocol/transformation/j|Z コンピ]] === | ||
Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。 | Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。 | ||
| - | === | + | ===エレクトロポレーション=== |
| + | アイジェムチバ2008では使用履歴なし。 | ||
== DNA精製 == | == DNA精製 == | ||
| Line 19: | Line 20: | ||
===[[Team:Chiba/protocol/DNA_Purification/qia/j|キアプレップ]]=== | ===[[Team:Chiba/protocol/DNA_Purification/qia/j|キアプレップ]]=== | ||
QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル | QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル | ||
| - | ===[[Team:Chiba/protocol/DNA_Purification/zymocleam/j| | + | ===[[Team:Chiba/protocol/DNA_Purification/zymocleam/j|ザイモDNAクリーン]]=== |
| + | ライゲーション過程などで必要不可欠なザイモクリーンのプロトコルです。 | ||
== アガロースゲル電気泳動 == | == アガロースゲル電気泳動 == | ||
*アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？ | *アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？ | ||
| - | : | + | :DNAを分離する手法のことです。 |
| - | : | + | :さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使います。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作です。 |
| - | : | + | :経験を積むほど素敵なゲルを作成することができます。職人の知恵と力量が試されます。簡単に言うときれいなゲルほど良いバンドがでるんです。 |
| - | ===[[Team:Chiba/protocol/gelcheck|アガロースゲル電気泳動]]=== | + | ===[[Team:Chiba/protocol/gelcheck/j|アガロースゲル電気泳動]]=== |
| - | + | アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。 | |
| - | + | ||
| - | + | ||
== ポリメラーゼ連鎖反応 == | == ポリメラーゼ連鎖反応 == | ||
| Line 35: | Line 35: | ||
:DNAを増幅させる手法のことです。 | :DNAを増幅させる手法のことです。 | ||
:これを使えばたったの2時間で目的の部分のDNAを増幅させることができます。 | :これを使えばたったの2時間で目的の部分のDNAを増幅させることができます。 | ||
| - | ===[[Team:Chiba/protocol/PCR|PCR]]=== | + | ===[[Team:Chiba/protocol/PCR/j|PCR]]=== |
卓上型PCR装置を使ったPCR法のプロトコルです。 | 卓上型PCR装置を使ったPCR法のプロトコルです。 | ||
| + | |||
| + | ==ダイジェスチョン== | ||
| + | === [[Team:Chiba/protocol/digestion/j|ダイジェスチョン]] === | ||
| + | DNAを制限酵素によって切断します。ライゲーションやDNAの長さを確認するために必要不可欠な操作です。 | ||
== ライゲーション == | == ライゲーション == | ||
| - | ===[[Team:Chiba/protocol/ligation/gelex|ゲル抽出]]=== | + | ===[[Team:Chiba/protocol/ligation/gelex/j|ゲル抽出]]=== |
| - | ===[[Team:Chiba/protocol/ligation/dephosphorylation|DNA脱リン酸化]]=== | + | アガロースゲル電気泳動後にそのゲルからDNAを抽出する操作です。 |
| - | === | + | |
| - | ===[[Team:Chiba/protocol/ligation/ligation|ライゲーション]]=== | + | ===[[Team:Chiba/protocol/ligation/dephosphorylation/j|DNA脱リン酸化]]=== |
| + | *SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは？ | ||
| + | :Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。 | ||
| + | :これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。 | ||
| + | |||
| + | === DNAリン酸化 === | ||
| + | アイジェムチバ2008では未使用。 | ||
| + | |||
| + | ===[[Team:Chiba/protocol/ligation/ligation/j|ライゲーション]]=== | ||
| + | ダイジェスチョンなどで作成した複数のDNA断片を組み替えてつなげる操作です。 | ||
== フェノタイプチェック == | == フェノタイプチェック == | ||
Latest revision as of 05:02, 27 June 2009
Contents |
形質転換
- 形質転換（通称：トラフォ）とは？
- 外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。
- アイジェムチバ2008では、XL10GOLD，BW35113，などの大腸菌株を使用しています。
Z コンピ
Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。
エレクトロポレーション
アイジェムチバ2008では使用履歴なし。
DNA精製
- DNA精製（通称：ミニプレ）とは？
- スモールスケールで生物からプラスミドを精製することです。
シグマプレップ
Sigma Miniprep kit によるDNA精製プロトコル
キアプレップ
QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル
ザイモDNAクリーン
ライゲーション過程などで必要不可欠なザイモクリーンのプロトコルです。
アガロースゲル電気泳動
- アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？
- DNAを分離する手法のことです。
- さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使います。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作です。
- 経験を積むほど素敵なゲルを作成することができます。職人の知恵と力量が試されます。簡単に言うときれいなゲルほど良いバンドがでるんです。
アガロースゲル電気泳動
アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。
ポリメラーゼ連鎖反応
- ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）とは？
- DNAを増幅させる手法のことです。
- これを使えばたったの2時間で目的の部分のDNAを増幅させることができます。
PCR
卓上型PCR装置を使ったPCR法のプロトコルです。
ダイジェスチョン
ダイジェスチョン
DNAを制限酵素によって切断します。ライゲーションやDNAの長さを確認するために必要不可欠な操作です。
ライゲーション
ゲル抽出
アガロースゲル電気泳動後にそのゲルからDNAを抽出する操作です。
DNA脱リン酸化
- SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは？
- Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。
- これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。
DNAリン酸化
アイジェムチバ2008では未使用。
ライゲーション
ダイジェスチョンなどで作成した複数のDNA断片を組み替えてつなげる操作です。
フェノタイプチェック
T9002 protocol
time-delay protocol
| ホーム | メンバー紹介 | プロジェクト紹介 | 作成したDNAパーツ | ノート |
|---|
