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	:外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。		:外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。
-	:アイジェムチバ2008では、XL10GOLDやJW1908などの大腸菌株を使用しています。	+	:アイジェムチバ2008では、XL10GOLD，BW35113，などの大腸菌株を使用しています。
	===[[Team:Chiba/protocol/transformation/j|Z コンピ]] ===		===[[Team:Chiba/protocol/transformation/j|Z コンピ]] ===
	Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。		Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。
	===エレクトロポレーション===		===エレクトロポレーション===
-	アイジェムチバ2008では未使用。	+	アイジェムチバ2008では使用履歴なし。
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	QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル		QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル
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		+	ライゲーション過程などで必要不可欠なザイモクリーンのプロトコルです。
	== アガロースゲル電気泳動 ==		== アガロースゲル電気泳動 ==
	*アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？		*アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？
-	:DNAを分離する手法のこと。	+	:DNAを分離する手法のことです。
-	:さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使う。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作。	+	:さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使います。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作です。
-	:経験を積むほど素敵なゲルを作成することができる。ゲルは美しいほうが好まれる。	+	:経験を積むほど素敵なゲルを作成することができます。職人の知恵と力量が試されます。簡単に言うときれいなゲルほど良いバンドがでるんです。
	===[[Team:Chiba/protocol/gelcheck/j|アガロースゲル電気泳動]]===		===[[Team:Chiba/protocol/gelcheck/j|アガロースゲル電気泳動]]===
	アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。		アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。
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		+	DNAを制限酵素によって切断します。ライゲーションやDNAの長さを確認するために必要不可欠な操作です。
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-	===[[Team:Chiba/protocol/ligation/gelex|ゲル抽出]]===	+	===[[Team:Chiba/protocol/ligation/gelex/j|ゲル抽出]]===
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		+	===[[Team:Chiba/protocol/ligation/dephosphorylation/j|DNA脱リン酸化]]===
		+	*SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは？
		+	:Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。
		+	:これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。
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	アイジェムチバ2008では未使用。		アイジェムチバ2008では未使用。
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		+	ダイジェスチョンなどで作成した複数のDNA断片を組み替えてつなげる操作です。
	== フェノタイプチェック ==		== フェノタイプチェック ==

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Latest revision as of 05:02, 27 June 2009

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Contents 1 形質転換 1.1 Z コンピ 1.2 エレクトロポレーション 2 DNA精製 2.1 シグマプレップ 2.2 キアプレップ 2.3 ザイモDNAクリーン 3 アガロースゲル電気泳動 3.1 アガロースゲル電気泳動 4 ポリメラーゼ連鎖反応 4.1 PCR 5 ダイジェスチョン 5.1 ダイジェスチョン 6 ライゲーション 6.1 ゲル抽出 6.2 DNA脱リン酸化 6.3 DNAリン酸化 6.4 ライゲーション 7 フェノタイプチェック 7.1 T9002 protocol 7.2 time-delay protocol

形質転換

• 形質転換（通称：トラフォ）とは？

外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。

アイジェムチバ2008では、XL10GOLD，BW35113，などの大腸菌株を使用しています。

Z コンピ

Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。

エレクトロポレーション

アイジェムチバ2008では使用履歴なし。

DNA精製

• DNA精製（通称：ミニプレ）とは？

スモールスケールで生物からプラスミドを精製することです。

シグマプレップ

Sigma Miniprep kit によるDNA精製プロトコル

キアプレップ

QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル

ザイモDNAクリーン

ライゲーション過程などで必要不可欠なザイモクリーンのプロトコルです。

アガロースゲル電気泳動

• アガロースゲル電気泳動（通称：ゲル電）とは？

DNAを分離する手法のことです。

さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使います。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作です。

経験を積むほど素敵なゲルを作成することができます。職人の知恵と力量が試されます。簡単に言うときれいなゲルほど良いバンドがでるんです。

アガロースゲル電気泳動

アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。

ポリメラーゼ連鎖反応

• ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）とは？

DNAを増幅させる手法のことです。

これを使えばたったの2時間で目的の部分のDNAを増幅させることができます。

PCR

卓上型PCR装置を使ったPCR法のプロトコルです。

ダイジェスチョン

ダイジェスチョン

DNAを制限酵素によって切断します。ライゲーションやDNAの長さを確認するために必要不可欠な操作です。

ライゲーション

ゲル抽出

アガロースゲル電気泳動後にそのゲルからDNAを抽出する操作です。

DNA脱リン酸化

• SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは？

Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。

これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。

DNAリン酸化

アイジェムチバ2008では未使用。

ライゲーション

ダイジェスチョンなどで作成した複数のDNA断片を組み替えてつなげる操作です。

フェノタイプチェック

T9002 protocol

time-delay protocol

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