Team:Chiba/protocol/j

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(DNA脱リン酸化)
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===[[Team:Chiba/protocol/ligation/dephosphorylation/j|DNA脱リン酸化]]===
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*SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは?
*SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは?
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:Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。
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:Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。
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:これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。
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:特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。
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:これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。
:これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。

Revision as of 14:08, 15 December 2008

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Contents

形質転換

  • 形質転換(通称:トラフォ)とは?
外部からDNAを加えて、その生物の性質を変える操作のことです。
アイジェムチバ2008では、XL10GOLDやJW1908などの大腸菌株を使用しています。

Z コンピ

Z-Competentcellsを使った形質転換のプロトコル。

エレクトロポレーション

アイジェムチバ2008では未使用。

DNA精製

  • DNA精製(通称:ミニプレ)とは?
スモールスケールで生物からプラスミドを精製することです。

シグマプレップ

Sigma Miniprep kit によるDNA精製プロトコル

キアプレップ

QIAprep Spin Miniprep kit によるDNA精製プロトコル

ザイモDNAクリーン

ライゲーション過程などで必要不可欠なザイモクリーンのプロトコルです。

アガロースゲル電気泳動

  • アガロースゲル電気泳動(通称:ゲル電)とは?
DNAを分離する手法のこと。
さまざまな実験操作後で、DNAの長さを確認する際によく使う。またライゲーションのためのゲル抽出の際にも行う操作。
経験を積むほど素敵なゲルを作成することができる。ゲルは美しいほうが好まれる。

アガロースゲル電気泳動

アガロースゲル作成から、DNAバンド観察までのプロトコルです。

ダイジェスチョン

ダイジェスチョン

ポリメラーゼ連鎖反応

  • ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)とは?
DNAを増幅させる手法のことです。
これを使えばたったの2時間で目的の部分のDNAを増幅させることができます。

PCR

卓上型PCR装置を使ったPCR法のプロトコルです。

ライゲーション

ゲル抽出

DNA脱リン酸化

  • SAP(Shrimp Alkaline Phosphetase)処理とは?
Self ligationなどの目的以外のサイト同士の結合も、リン酸基が残っているとおきてしまいます。これらの反応は少なくともligation反応を阻害する反応です。特にベクターだけのSelf ligationは目的のDNAが含まれていなくても、oriやマーカーがDNAに含まれているため、菌内で増殖し、かつ、抗生物質も効かないプラスミドができてしまいます。
これを防ぐためにベクター側のリン酸基を処理しようというのが、ここで紹介するプロトコルになります。

DNAリン酸化

アイジェムチバ2008では未使用。

ライゲーション

フェノタイプチェック

T9002 protocol

time-delay protocol